论文部分内容阅读
人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）是获得性免疫缺陷综合征（Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）的病原体，该病毒自第一次被发现以来一直是困扰人类健康的重大问题。虽然抗逆转录病毒疗法（antiretroviral therapy, ART）大大改善了艾滋病患者的生存质量，但ART疗法会造成耐药毒株的出现、同时长期服用药物会引起副作用，导致严重的经济负担。研发有效的预防和治疗性疫苗一直是防控 HIV感染和治疗艾滋病人的目标。然而目前HIV-1疫苗研发仍然面临许多重大难题。首先HIV-1极易发生突变并可通过多种方式逃避机体免疫系统，这为疫苗的研发带来较大的挑战。再者不同种族人群MHC免疫限制性的差别也影响疫苗诱导的免疫应答。 本课题组前期通过分析我国人群的MHC免疫限制性特征和目前我国HIV主要流行株特征，设计表达了一种针对中国人MHC限制性特点和HIV-1流行特征的多表位蛋白候选疫苗（命名为MEP1）。本研究将对重组MEP1蛋白疫苗诱导的免疫反应特征进行系统研究，并探索Th表位在MEP1蛋白诱导的免疫应答中的作用。 1、HIV-1多表位疫苗MEP1的免疫特征研究 （1）免疫次数对重组蛋白MEP1诱导的免疫应答的影响：将MEP1和铝盐佐剂免疫6-8周雌性BALB/c小鼠，比较单次及加强免疫诱导的体液以及细胞免疫。结果表明，在三免后两周（初免后十周），加强免疫其诱导的抗MEP1抗体IgG、IgG1和IgG2a以及细胞免疫（IFN-γ、IL-4），均显著高于单次免疫。说明加强免疫可以诱导小鼠产生更高水平的免疫应答。 （2）重组蛋白MEP1诱导的早期免疫应答特征研究：以MEP1和铝盐佐剂通过肌肉途径免疫小鼠，PBS作为对照。免疫后第10天，检测其体液（抗体IgM， IgG及其亚类）以及细胞免疫（IFN-γ、IL-4）。结果表明，早期免疫MEP1可以诱导产生一定水平的IgM抗体，而IgG及其亚类则未能检出；其诱导的细胞免疫（IFN-γ和IL-4）接近三免后两周水平。说明MEP1在免疫早期即可诱导较强的细胞免疫。 （3）重组蛋白MEP1诱导的长期免疫应答特征研究：为了探究MEP1在小鼠体内诱导的长期免疫应答特征，小鼠三次免疫后，不同时间（初免后0、4、6、10、14、18、22、24、40、44、48、52周）采集小鼠血清进行ELISA检测，并且在不同时间点（初免后1.5、10、14、24、44、52周）处死部分小鼠取脾进行ELISPOT检测。结果发现抗体水平在三免后两周达到峰值，并且一直维持在较高水平；细胞免疫在初免后10天即达到较高水平，并且维持到52周。结果表明，MEP1可以诱导长期的高水平免疫应答。 （4）重组蛋白MEP1在老龄鼠中诱导的免疫应答特征研究：为了观察MEP1能否在老龄鼠体内诱导有效的免疫应答，选取64-66周雌性BALB/c小鼠，三免后两周检测其体液及细胞免疫。结果表明，MEP1在老龄鼠中可以诱导较高水平的抗体和细胞免疫。说明MEP1在老龄鼠中同样具有良好的免疫原性。 2、Th表位在重组蛋白MEP1中的作用研究 （1）MEP1-CTL-E蛋白的表达及鉴定：构建不含 Th表位的重组质粒 pQE30- MEG1-CTL-E，利用SDS-PAGE及Western blot鉴定其表达，Ni+柱亲和层析纯化，透析复性获得纯度较高、特异性好的MEP1-CTL-E蛋白。 （2）MEP1-CTL-E与MEP1诱导的免疫应答的比较研究：以MEP1-CTL-E和铝盐佐剂三次免疫BALB/c小鼠，MEP1为对照组，分别观察其在三免后两周以及长期的体液及细胞免疫应答，通过比较二者诱导的免疫应答的异同，获得 Th表位在MEP1诱导的免疫应答中的作用。结果表明，MEP1-CTL-E在三免后两周诱导的抗体水平显著低于MEP1，细胞免疫应答水平则无显著差别，说明Th表位可以增强小鼠针对 MEP1-CTL-E诱导的体液免疫应答。长期观察结果表明，与MEP1-CTL-E相比，含有Th表位的MEP1可以较早诱导抗体产生，其抗体水平较高，而且抗体维持时间较长，细胞免疫应答水平则无显著差别。以上结果表明Th表位有助于MEP1蛋白诱导较早的、长期以及高水平的体液免疫应答。3、结论 HIV-1多表位蛋白疫苗MEP1具有较好的免疫原性，免疫次数是影响其免疫原性的重要因素。MEP1不但可以诱导较高水平的早期免疫应答，而且可以诱导长时间、高水平的免疫应答（至少一年）。更为重要的是，MEP1蛋白在老龄鼠中也可以诱导较高水平的免疫应答。Th表位可以增强MEP1诱导的体液免疫应答，并且与MEP1能够较为快速诱导机体产生免疫应答，以及维持机体产生持久性的高水平体液免疫应答有关。