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目的：研究片仔癀(Pien Tze Huang, PZH)对miR-494-3p及其靶基因表达的影响,探讨PZH增加大肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)敏感性和抑制其转移的部分作用机制,为片仔癀临床抗癌应用提供进一步的实验依据。方法：本研究选用大肠癌5-FU耐药细胞株HCT-/5-FU和其亲本细胞株HCT-8作为研究对象；首先采用MTT法验证HCT-/5-FU细胞的5-FU耐药性；进而通过Real time PCR检测两株细胞及PZH对耐药株miR-494-3p的表达；通过细胞转染将miR-494-3p模拟物(miR-494-3p mimic)和miR-494-3p抑制剂(miR-494-3p inhibitor)分别转至HCT-8/5-FU和HCT-8细胞,并用Real time PCR验证其转染效率；再以MTT法检测转染miR-494-3p mimic的HCT-8/5-FU细胞和转染：miR-494-3p inhibitor的HCT-8细胞的5-FU敏感性；接着采用台盼蓝染色观察PZH对转染miR-494-3p inhibitor后HCT-8细胞活细胞数目的影响；通过集落形成实验观察PZH对转染miR-494-3p inhibitor后HCT-8细胞集落形成能力的影响；通过Transwell实验观察转染miR-494-3p mimic和inhibitor后的细胞及PZH对转染miR-494-3p inhibitor后HCT-8细胞迁移能力的影响；最后通过Real time PCR和Western Blot检测PZH对耐药、转移相关的miR-494-3p靶基因mRNA和蛋白表达水平的影响。结果：1.片仔癀调控miR-494-3p增加大肠癌细胞5-氟尿嘧啶敏感性经MTT法验证HCT-8/5-FU细胞具有5-FU耐药性,进而通过Real time PCR发现miR-494-3p在大肠癌5-FU耐药细胞HCT-8/5-FU中表达水平下调(P<0.05),且PZH可上调HCT-8/5-FU细胞miR-494-3p的表达水平(P<0.05)。分别转染lniR-494-3p mimic和inhibitor至HCT-8/5-FU和HCT-8细胞,经5-FU干预48小时后,采用MTT法观察到转染miR-494-3p mimic后可增加HCT-8/5-FU细胞的5-FU敏感性(P<0.05),反之,转染miR-494-3p inhibitor后可降低HCT-8细胞的5-FU敏感性(P<0.05)。台盼蓝染色实验观察到5-FU、PZH单独干预使转染miR-494-3p inhibitor后HCT-8细胞活细胞数目减少,PZH联合5-FU干预效果更为显著(P<0.05)；集落形成实验结果显示5-FU、PZH单独干预使转染miR-494-3p inhibitor后HCT-8细胞的集落形成不同程度减少,PZH联合5-FU干预效果更佳(P<0.05)。Real time PCR和Western Blot结果显示HCT-8细胞中转染miR-494-3p inhibitor可提高DPYD、c-Myc的表达,5-FU和PZH单独干预均可造成DPYD和c-Myc的表达不同程度下调；而PZH联合5-FU干预后DPYD和c-Myc表达下调更为显著(P<0.05)。2.片仔癀调控miR-494-3p抑制大肠癌细胞的迁移能力Transwell实验发现在HCT-8/5-FU细胞转染miR-494-3p mimic后,该细胞的迁移能力受到显著抑制(P<0.05)；而在HCT-8细胞中转染miR-494-3p inhibitor后,该细胞的迁移能力显著升高(P<0.05)。通过Transwell实验观察到,经PZH干预后,转染miR-494-3p inhibitor的细胞迁移能力随药物浓度的增加而下降(P<0.05)。Western Blot结果显示转染miR-494-3p inhibitor后,HCT-8细胞中TGF-β和ZEB2蛋白的表达水平均显著增高(P<0.05)：经不同浓度PZH干预后,TGF-β的表达在PZH浓度为0.5mg/ml、 0.75mg/ml均有显著下降(P<0.05)；相似地,ZEB2的蛋白水平在PZH浓度为0.5mg/ml、 0.75mg/ml也呈现显著下降(P<0.05)。结论：niR-494-3p及其下游靶基因是参与PZH增加5-FU敏感性和抑制迁移能力的重要因子,对其表达水平的调控可能是PZH增加大肠癌细胞5-FU敏感性抑制其转移的重要机制。