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近年来,日益增多的病例表明维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）已成为一种重要的人、兽及水生生物共患病原菌,并在食品安全上表现出重要意义,一些国家已把A.veronii及其同属菌作为水体质量和食品安全的检疫对象。目前,国内外有关A.veronii病例的报道逐年增多,其流行呈明显上升趋势。相关研究表明A.veronii的毒力在逐渐增强,但目前对A.veronii致病机制的研究相对较少,国内外有关A.veronii毒力因子的研究也并不多且主要是针对常见毒力因子的研究。而对A.veronii新毒力因子的挖掘和研究将有助于我们进一步了解其致病机制。因此,本研究基于串联质谱标签技术（Tandem Mass Tag,TMT）首次对A.veronii不同毒力菌株的蛋白质组进行比较分析,筛选出了不同毒力菌株间的部分差异表达蛋白并预测了其相互间可能存在的关系;并首次对鱼源致病性A.veronii强毒株TH0426的全基因组（完成图）进行了测序和分析,同时完成了对弱毒株AV161和无毒株CL8155基因组框架图的测定,在基因组水平上对其比较分析,初步揭示了A.veronii强、弱及无毒株在基因组水平上的差异;此外,通过比较基因组学分析了目前已公布的所有39株不同来源的A.veronii的遗传进化关系,初步了解了A.veronii的遗传进化规律;最后,利用基因敲除技术对强毒株TH0426中两个高表达蛋白（Porin蛋白和LamB蛋白）编码基因aha和lamB的功能进行了初步分析,主要研究结果如下:（1）TMT比较蛋白质组分析结果显示,A.veronii强、弱及无毒株间的蛋白表达差异明显,相互间存在多种上调和下调表达蛋白,其中强毒株TH0426和弱毒株AV161之间共鉴定出78个差异表达蛋白,强毒株TH0426和无毒株CL8155之间有90个差异表达蛋白,而弱毒株AV161和无毒株CL8155之间共鉴定出92个差异表达蛋白;分析发现强毒株TH0426中存在16个蛋白其表达量明显高于弱毒株和无毒株,经进一步GO和KEGG功能富集分析发现,这些蛋白主要参与两条代谢通路即细菌趋化过程和不同环境下的微生物代谢过程,表明TH0426对不同环境的适应能力可能更强;此外,分析还发现赖氨酸脱羧酶CadA,核酸内切酶L-PSP,麦芽糖孔蛋白LamB,普鲁兰酶和气溶素Aer这5个蛋白表达量的高低与菌株毒力强弱呈现出正相关的趋势,推测这五个蛋白可能与A.veronii的毒力密切相关;实时荧光定量PCR和质谱多反应监测（Multiple Reaction Monitoring,MRM）技术对部分差异表达蛋白的验证结果与TMT鉴定结果一致,表明A.veronii不同毒力菌株间差异表蛋白的鉴定结果准确可靠。（2）对A.veronii强毒株TH0426全基因组的测序和分析发现,基因组中存在多种毒力因子如菌毛、鞭毛、毒素、铁离子摄取系统以及各型分泌系统（II型、III型和VI型）等,而且TH0426基因组中还存在2个编码普鲁兰酶的基因（AMS6419745和AMS6420505）和2个编码几丁质酶的基因（A MS6400725和AMS6405940）,与第一章差异表达蛋白的筛选结果一致,这两种酶在TH0426中的表达量明显高于AV161和CL8155;对A.veronii强、弱及无毒株的毒力因子比较分析发现,强毒株TH0426基因组中含有两套完整的III型分泌系统,其中III型分泌系统API2和铁离子转运系统是TH0426所特有的,此外TH0426还具有TA系统、前噬菌体序列、CRISPR-Cas系统以及重组系统等特有功能基因簇,这些功能基因簇对TH0426在抵抗感染、适应不同环境、遗传进化以及致病性等方面可能具有重要的作用。（3）对目前已公布的所有39株不同来源的A.veronii的基因组比较分析发现,39株A.veronii存在1993个共有的核心基因,这些共有核心基因可能是维持A.veronii基本特征所必需的基因;基于这些核心基因构建的39株A.veronii系统进化树显示菌株AMC34与另外38株A.veronii之间亲缘关系较远,而其余38株A.veronii之间亲缘关系很近,而且基于39株A.veronii全基因组之间的平均核苷酸同源性（Average Nucleotide Identity,ANI）分析结果与此一致,这表明菌株AMC34很可能不属于A.veronii;此外,基于对39株A.veronii共有核心基因和ANI值的分析可以看出A.veronii亲缘关系的远近与其分离地点没有明显的相关性,但在一定程度上与其来源有关,来源相同或相近的菌株其亲缘关系较近,这表明宿主环境对A.veronii进化的影响更为明显。（4）成功构建A.veronii强毒株TH0426的aha和lamB基因缺失突变株,其中缺失株△aha生物被膜形成能力显著下降3.7倍,对EPC细胞的黏附和侵袭能力也下降2.3倍,缺失株△aha对斑马鱼和小鼠的致病性明显减弱,其中对斑马鱼的LD50升高了80.4倍,对小鼠的LD50升高了10.1倍,毒力显著下降;与缺失株△aha相似,缺失株△lamB生物被膜形成能力显著下降5.6倍,比缺失株△aha下降更为明显,对EPC细胞的黏附和侵袭能力下降了有1.8倍,缺失株△lamB对斑马鱼和小鼠的致病性也明显减弱,对斑马鱼的LD50升高了13.7倍,对小鼠的LD50升高了5.6倍,毒力下降明显;而且aha和lamB基因的缺失,影响了TH0426鞭毛的稳定性,缺失株的游动能力完全丧失;试验结果表明aha和lamB基因的缺失使得TH0426的黏附能力和毒力显著下降。综上所述,本研究从蛋白质组水平和基因组水平上对A.veronii强、弱及无毒株之间的差异进行了初步探讨,分析发现存在于强毒株中的一些高表达蛋白以及基因组中的特有功能基因簇如III型分泌系统API2和铁离子摄取系统等可能是A.veronii TH0426毒力强于AV161和CL8155的原因;遗传进化分析显示A.veronii亲缘关系的远近与其分离地点没有明显的相关性,但宿主环境对A.veronii进化的影响更为明显;强毒株TH0426中高表达蛋白Porin和LamB的编码基因aha和lamB的缺失使得TH0426的黏附能力和毒力显著下降,强毒株中的这些高表达蛋白可能与TH0426的致病性密切相关。上述研究结果将会为进一步阐明A.veronii的致病机制提供一些依据。