论文部分内容阅读
目的:分析R5型gp120对心肌细胞损伤机制及丹酚酸B保护效应。方法:采用培养4d的SD大鼠乳鼠心肌细胞。1观察R5型HIV-1 gp120与心肌细胞CCR5受体结合情况:实验分3组:Control、gp120、gp120+DAPTA组。gp120+DAPTA组加10μM DAPTA(CCR5阻断剂)孵育0.5h,gp120、gp120+DAPTA组加Alexa Flour 532 HIV-1 gp120(JRFL)0.1μg,培养4h。2观察不同浓度R5型HIV-1gp120对心肌细胞损伤效应:实验分6组(n=5)。分别加不同剂量(0、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0μg/ml)R5型HIV-1gp120,培养4h。测培养基乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)。3观察不同浓度R5型HIV-1gp120对心肌细胞P38MAPK和c Tn I磷酸化影响:实验分4组(n=3),分别加不同浓度(0、0.2、0.4、0.8μg/ml)R5型HIV-1gp120,培养4h。提取心肌细胞蛋白,Western Blot测P38MAPK和c Tn I磷酸化水平。4观察P38MAPK阻断剂对心肌细胞R5型HIV-1gp120损伤的影响:实验分4组(n=5):Control、gp120、gp120+SB203580、SB203580组。其中gp120组加0.8μg/ml R5型HIV-1 gp120,gp120+SB203580组加等量gp120另含10μM SB203580,SB203580组加10μM SB203580,培养4h,测培养基LDH、CK含量。5观察CCR5阻断剂对R5型HIV-1gp120致心肌细胞P38MAPK磷酸化影响:实验分4组(n=3):Control、gp120、gp120+DAPTA、DAPTA组。gp120+DAPTA、DAPTA组加20μM DAPTA孵育0.5h;除Control组外,各组加0.4μg/ml R5型HIV-1gp120,培养4h,提取心肌细胞蛋白,Western Blot测P38MAPK和c Tn I磷酸化水平。6观察NMDAR阻断剂对R5型HIV-1 gp120致心肌细胞P38 MAPK、c Tn I磷酸化影响:实验分5组(n=3):Control、gp120、gp120+不同剂量(2、20、200μM)MK801组。gp120+不同剂量MK801组加MK801浓度分别为2、20、200μM,孵育0.5h;除Control组外,其余各组加0.4μg/ml R5型HIV-1gp120,培养4h,提取心肌细胞蛋白,Western Blot测P38MAPKP38MAPK和c Tn I磷酸化水平。7观察不同剂量丹酚酸B对心肌细胞R5型HIV-1gp120损伤的保护效应:实验分7组(n=3):Control、gp120、gp120+不同剂量(20、40、80、100μM)丹酚酸B、gp120+SB203580组。gp120组加0.8μg/ml R5型HIV-1gp120;gp120+不同剂量丹酚酸B组除加等量gp120外,另含丹酚酸B浓度分别为20、40、80、100μM;gp120+SB203580组除加等量gp120另含10μM SB203580,培养24h,测培养基LDH、CK含量,Western Blot测心肌细胞P38 MAPK磷酸化水平。结果:1 Control组心肌细胞无荧光,gp120组心肌细胞呈现黄色荧光;与gp120组比较,gp120+DAPTA组心肌细胞黄色荧光减弱(p<0.05)。2 R5型HIV-1gp120呈浓度依赖性增高培养基LDH、CK含量,其中0.8、1.0、2.0μg/ml剂量组增高明显(p<0.05)。3 R5型HIV-1gp120呈浓度依赖性增加心肌细胞P38MAPK和c Tn I磷酸化,其中0.4、0.8μg/ml组增加明显(p<0.05)。4 SB203580降低R5型HIV-1gp120引起的LDH、CK含量升高(p<0.05)。5与Control组比较,gp120组心肌细胞P38 MAPK、c Tn I磷酸化增多(p<0.05),DAPTA组无差别(p>0.05);与gp120组比较,gp120+DAPTA组P38 MAPK、c Tn I磷酸化减少(p<0.05)。6与Control组比较,gp120组心肌细胞P38MAPK、c Tn I磷酸化增多(p<0.05);与gp120组比较,不同剂量(2、20、200μM)MK801组P38MAPK、c Tn I磷酸化无明显差别(p>0.05)。7与Control组比较,gp120组LDH、CK高(p<0.05),gp120+SB203580组无差别(p>0.05);与gp120组比较,gp120+不同剂量丹酚酸B组LDH、CK含量降低,其中80、100μM丹酚酸B组降低明显(p<0.05)。与Control组比较,gp120组心肌细胞P38 MAPK磷酸化增加(p<0.05);与gp120组比较,gp120+不同剂量(20、40、80、100μM)丹酚酸B组心肌细胞P38 MAPK磷酸化减少,其中80μM丹酚酸B组P38 MAPK磷酸化最少(p<0.05)。结论:R5型HIV-1gp120可通过心肌细胞CCR5引起P38MAPK磷酸化,介导对心肌细胞损伤;适宜剂量丹酚酸B可保护心肌细胞防止R5型HIV-1gp120引起P38MAPK磷酸化损伤。