原发性痛经离体器官模型和细胞模型的建立及应用

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原发性痛经(Primary Dysmenorrhea)是妇科常见的疾病,以其高发病率(20%~90%)而引起人们的重视。近年来,国内外研究认为原发性痛经患者月经期子宫内膜合成和分泌过量的前列腺素F(PGF)引起子宫强烈甚至痉挛性收缩,导致了痛经的发生。中医药治疗原发性痛经颇具特色,可获得较好的治疗效果,且毒副作用极小,疗效巩固,不易复发,但其作用机理目前仍不明确。为探讨中药治疗原发性痛经的作用机理,本文针对原发性痛经的发病机理建立了原发性痛经的离体器官模型和细胞模型,应用这些模型验证了治疗原发性痛经中药的作用,并对其机理进行了探讨。 本文第一部分论述了运用催产素导致子宫收缩的作用建立原发性痛经的离体器官模型,对该模型最适条件进行了研究,并运用该模型对常用于原发性痛经治疗的当归、芍药、金荞麦、香附、桂枝、蒲黄、丹参、益母草、川芎、夏枯草、白术、艾叶、柴胡、泽泻、枳实等15味单味中药及三个中药复方进行筛选,观察药物对离体子宫收缩的影响。结果显示当归、香附、桂枝、枳实等药物及中药复方1均显示出对催产素导致子宫收缩明显的抑制作用,而丹参则表现出了加强子宫收缩的作用。 针对PGF导致痛经这一机理,本文第二部分运用催产素可以导致子宫内膜合成和分泌前列腺素增多这一原理,首次建立了原发性痛经细胞模型。首先建立了大鼠子宫内膜上皮(EC)和基质细胞(SC)的培养方法,为分析细胞分泌的微量PGs,继而建立起了运用高效液相测定PGF的方法,以观察药物对PGF的影响。结果显示运用高效液相法原发性痛经离体器官模型和细胞模型的建立及应用测定PGFZ。精确稳定,可以运用于PGFZ。的测定。催产素可以诱导子宫内膜上皮细胞而不是基质细胞释放PGFZ。,叫噪美辛可剂量依赖性抑制OT的作用,采用OT诱导离体EC释放PGFZ。的方法,观察药物对PGFZa的影响,可以直接反应出PG抑制药物的作用,可用于药物的筛选。本文对苗体激素在原发性痛经发病过程中的作用进行了初步探讨,结果证实,孕激素可使OT诱导的PGFZ。升高降至很低水平,中药复方1可显著抑制PG凡。的升高(P>0.05)。 OT可诱导子宫内膜细胞合成PGs,但其胞内机制仍不是很明确。本文第三部分对OT及药物作用机理进行了探讨。使用Fluo一3作为荧光指示剂,流式细胞术测定胞浆内游离钙的浓度,Griess法测定NO的量,酶法测定Nos/iNOS含量。结果证实OT可升高EC胞内钙离子浓度。OT可能通过胞内钙途径促进了COX一2的表达及PGs的释放。雌、孕激素均能明显降低OT诱导的EC胞内钙含量;当同时出现雌、孕激素时,这一作用更加显著。叫噪美辛及中药复方1也有抑制OT诱导的EC胞内钙含量升高的作用。对NO及NOS系统的研究显示,OT能明显抑制EC细胞NOS(尤其是iNOS)及NO的产生,而对SC作用不明显,提示子宫内膜上皮细胞(而不是基质细胞)参与了iNOS的调控,雌激素对OT抑制iNOS及NO的产生具有促进作用,为雌激素拮抗iNOS活性的观点提供了证据。
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