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鸭传染性浆膜炎(Duck infectious serositis)是一种由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的传染病,常呈急性、败血性,曾经被称为新鸭病(New ducks syndrom)、鸭败血症(nuekseptieemia)和鸭疫综合症(Anatipestifer syndrome)等,家鸭、野鸭、雏鹅、火鸡和野鸡及多种其他鸟类易感。病变主要特征为纤维素性心包炎、肝周炎、纤维素性肺炎,俗称“三包”。另外,病变中也常见气囊炎、关节炎、结膜炎、脑膜炎等症状。目前,疫苗预防和抗菌药治疗是防治该病的主要手段。因此,对临床收集的疑似病例进行RA的分离鉴定、耐药性检测、病原血清型的分型对临床养殖过程中选择高敏感度药物、合适疫苗等具重要指导意义。本研究主要分以下三个部分:一、RA单因子血清的制备该试验选用7株山东省主要流行血清型RA标准品制备了7种免疫原,对14只2Kg左右的雄性家兔进行免疫后心脏采血制备抗血清。经检测,抗血清与本血清型菌体的凝集效价结果均可达到1:4800。多次交叉吸收试验后,得到1型、2型、6型、7型、10型、11型、13型7种单因子血清,7种单因子血清的效价分别是1:1600、1:1600、1:3200、1:800、1:3200、1:800、1:1600。制备的7种RA抗血清均只能同一血清型RA菌体抗原出现肉眼可见的凝集现象,而与其他血清型RA菌体抗原均无交叉反应现象,显示这7种单因子血清特异性较好,可用于鉴定RA临床分离菌株的血清型。二、山东省潍坊市RA临床分离株的分离鉴定山东省潍坊市是山东省重要的养殖大市。本研究病料来自山东省潍坊市临床为疑似浆膜炎的病死鸭。无菌采集病料肝脏、脑等组织,接种于改良版马丁固体培养基(含血清)上,倒置于烛缸中,37℃培养18-24 h后进行观察,选取单个疑似菌落进行革兰氏染色,进行镜检,形态为阴性、单个或链状排列的短状杆菌;生化试验检测,该菌与过氧化氢酶和氧化酶反应等现象均符合RA的生化特性。纯化培养疑似菌株后提取菌株核酸进行PCR检测,仅试验组提取核酸中获得长度约为809 bp的目的片段。使用制备的7种单因子血清对23株临床分离RA菌株进行血清型鉴定,结果显示这23株菌只属于3个血清型:1型、2型和11型,其中1型和2型为该地区的优势血清型,分别占分离菌株的43.4%(10/23)和47.8%(11/23)。三、23株RA分离株的耐药性检测对23株RA菌株进行药敏试验与耐药基因的检测。结果表明:潍坊地区分离到的23株RA对氨基糖苷类、喹诺酮类药物耐受力极强,仅有少数菌株对其较敏感;23株中有21株分别检测到了aac(6’)-Ib、ant(3")-Ia和aph(3’)-IIa三种介导氨基糖苷类药物耐药的钝化酶基因、16S RNA的甲基化酶armA。另外,检测qnra、qnrB、qnrC、qnrD RA质粒介导对喹诺酮类药物耐药的4种qnr基因和2种外排泵基因QepA和oqxAB,结果显示仅少数菌株检测到了qnrS基因,其它的qnr基因和外排泵基因均未检测到。