抗水貂肠炎病毒卵黄抗体的研究

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水貂病毒性肠炎,是由水貂肠炎病毒(MEV)引起的一种急性、高度接触性、致死性传染病。此病广泛存在于世界各地,断奶仔貂和幼龄水貂最容易被感染,其死亡率高达60-90%,是威胁水貂养殖的三大疾病之一,给养貂业带来了非常大的经济损失。水貂病毒性肠炎没有特异性的治疗药物,就连干扰素在体外也不能够抑制病毒的复制。虽然已经有针对水貂肠炎病毒的灭活疫苗和弱毒疫苗,但是灭活疫苗的免疫效力相对较低,而且不能引导机体产生细胞免疫,制备的弱毒疫苗存在毒力返祖的潜在危险性。卵黄抗体以其特有的优势:低成本高产量、化学性质较IgG稳定、相对动物的种系生物学距离较远,已经成为近年来生物技术和新药领域的研究热点。虽然研究显示IgY与IgG相比具有较强的耐酸碱和酶消化的能力,但是仍然有研究表明,IgY在经过胃部剧烈的酸性环境后,丧失其生物活性。为了能够发挥IgY的生物学作用,必须保证IgY能够耐受胃部的剧烈环境而到达效应部位发挥其生物功能。本研究采用F81细胞增殖水貂肠炎病毒,经甲醛灭活后与配以油乳佐剂,免疫产蛋鸡,得到抗水貂肠炎病毒的卵黄抗体,采用水稀释法提取IgY。运用双抗夹心法ELISA检测IgY的特异性,结果显示制备的卵黄抗体能够与水貂肠炎病毒结合,证实提取的IgY能够识别水貂肠炎病毒。血凝抑制实验和中和实验显示提取的IgY可以抑制水貂肠炎病毒对猪红细胞凝血作用,能够中和水貂肠炎病毒,保护F81细胞不发生病变。提取的IgY在胃模拟液中很快失去血凝抑制作用,其活性几乎是在加入的瞬间就丧失了,在模拟肠液液中IgY的血凝抑制效价随着时间的延长而逐渐丧失,4小时后完全失去血凝抑制作用。为使IgY在经过胃部环境以后仍然保持其生物活性,采用Eudragit L100-55作为骨架材料,制备骨架型缓释片。实验结果证明制备的骨架型缓释片能够使IgY耐受胃部的环境,在肠模拟液中很快释放,并检测到IgY的血凝抑制效价。
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