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艾叶为菊科多年生草本植物艾（Artemisia argyi Lévl.et Vant.）的干燥叶,是临床常用传统中药。艾叶挥发油是其主要有效成分群,具抗菌抗病毒、平喘镇咳祛痰、抗过敏、免疫、护肝利胆等作用[1-9]。本课题组前期研究,首次发现艾叶挥发油具有抗乙肝病毒活性[10]。为研究艾叶挥发油抗乙肝病毒（HBV）新药,又鉴于艾叶挥发油水难溶、易挥发、不稳定,影响药效,本文对艾叶挥发油纳米结构脂质载体（Nanostructured lipid carrier system,NLC）进行了研究,包括:艾叶挥发油NLC的制备、质量评价、药代动力学、组织分布和药效学。此研究未见报道。1.艾叶挥发油NLC的制备及质量评价采用加热熔融-超声分散法制备艾叶挥发油NLC,通过单因素实验和正交试验优化制备工艺及处方。最佳制备工艺为:初乳搅拌10min,超声时间15min,超声振幅100%。最佳处方为:波洛沙姆188 0.45g,蛋黄卵磷脂0.15g,单硬脂酸甘油酯0.1g,辛酸/癸酸甘油三酯0.1g,艾叶挥发油0.1g,蒸馏水加至20m L。通过气相色谱法建立了艾叶挥发油NLC的多成分定量测定方法。方法精密度高,重现性好,桉油精、樟脑、龙脑加样回收率均在95%?105%之间。测得的桉油精、樟脑、龙脑的含量分别为16.34%、3.32%、5.92%。采用纳米粒度分析仪测定粒径与Zeta电位,釆用指纹图谱进行质量整体描述及工艺评价,并从包封率、载药量、体外释放度及稳定性来评价制剂的特性。艾叶挥发油NLC平均粒径为（72.33±1.93）nm,PDI为（0.273±0.0045）,Zeta电位为（-30.59±1.42）mv。桉油精、樟脑、龙脑包封率分别为87.49%、86.45%、92.12%,载药量分别为8.25%、2.00%、3.38%。指纹图谱得出十批制剂的相似度均大于0.990,说明十批制剂一致性好,工艺质量稳定。从体外释放度结果可知,在120h时,艾叶挥发油NLC的释放度为61.12%,而原料药的释放度为72.46%,相同时间制剂的释放度比原料药的低,说明艾叶挥发油NLC具有缓释性。药物稳定性实验表明,艾叶挥发油NLC在高温、强光照条件下易发生变化,应放置在4℃条件下避光保存。2.艾叶挥发油与其NLC的药代动力学及组织分布研究本文首次建立了艾叶挥发油及NLC在血浆中桉油精含量的GC测定方法,并对其在大鼠体内的药代动力学进行了研究。艾叶挥发油以1000mg/kg的剂量灌胃、140mg/kg的剂量尾静脉注射给药,艾叶挥发油NLC以同等于艾叶挥发油剂量给药,给药后于不同时间点取血,GC法检测桉油精的血药浓度,采用DAS3.0药代动力学软件拟合,得药代动力学参数。灌胃4h后,艾叶挥发油NLC达到最大血药浓度（Cmax）11.4835μg/L,半衰期（t?）为8.727h,而艾叶挥发油Cmax为9.1064μg/L,t?为7.779h;艾叶挥发油NLC灌胃后的药时曲线面积AUC0-∞为160.283μg/L·h,艾叶挥发油AUC0-∞为103.681μg/L·h。结果表明,艾叶挥发油NLC延长了艾叶挥发油在体内的作用时间,提高了药物生物利用度,改变了药物的药代动力学特征。本文通过小动物活体成像跟踪纳米粒在不同时间不同组织中的分布情况。设立A、B、C三组,A组为生理盐水组,B组为Di R染料组,C组为Di R-NLC组,于不同时间点麻醉,放置于小动物活体成像仪中进行观察拍照,并于24h后取出裸鼠的心、肝、脾、肺、肾各组织,放置到小动物活体成像仪中进行观察拍照,研究纳米粒在裸鼠体内不同组织中的分布情况。结果表明,随着时间的延长,纳米粒逐渐在肝部位蓄积,且从体外不同器官的荧光强度图可知,Di R-NLC组肝脏部位荧光强度比染料组强,因此表明艾叶挥发油NLC具有肝脏靶向性。3.艾叶挥发油及其NLC抗HBV药效学研究采用鸭乙肝病毒模型来观察艾叶挥发油及其NLC的抗HBV作用。1日龄麻鸭正常饲养3天后静脉注射含DHBV的强阳性血清进行攻毒,7天后使用PCR法筛选出感染乙肝病毒的阳性鸭,然后取阳性鸭112只随机分成8组,给予不同剂量的艾叶挥发油及NLC,连续给药15天,于给药后5d、10d、15d及停药后3d检测血清和肝脏组织中DHBV DNA水平,评价艾叶挥发油及其NLC的抗HBV活性。结果表明,艾叶挥发油及NLC对鸭血清及肝脏组织中HBV均有抑制作用,高剂量抑制作用更明显,且艾叶挥发油NLC抑制作用比原料药更显著。本文首次研究了艾叶挥发油NLC,为艾叶挥发油抗HBV新药的研究提供了科学依据。