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目的:研究靶向白介素6(interleukin 6,IL-6)基因慢病毒介导RNA干扰治疗小鼠胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)的效果及进一步探索IL-6引发关节炎的潜在机制。方法:第一部分:构建靶向IL-6的三条小干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs),siRNAs分别转染至小鼠巨噬细胞J774A.1内,实时荧光定量(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)筛选干扰效率最高的siRNA序列。根据序列构建靶向IL-6慢病毒(LV-IL6-RNAi)颗粒,病毒颗粒感染J774A.1细胞,荧光显微镜下观察确定病毒感染最佳滴度,RT-qPCR检测病毒干扰效率。在体内,利用DBA/1小鼠构建CIA模型。LV-IL6-RNAi组为实验组,以空病毒(LV-NC-RNAi)为阴性对照组,甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)为阳性对照组,分组注射治疗后进行CIA关节炎评分。酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠血清IL-6、白介素-1β(interleukin,IL-1β)和肿瘤坏死因子-ɑ(tumor necrosis factorɑ,TNF-ɑ),苏木精—伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE staining)检测踝关节炎症细胞浸润。第二部分:免疫组织化学观测健康小鼠、LV-NC-RNAi组和LV-IL6-RNAi组小鼠踝关节IL-6浸润。蛋白印迹检测踝关节滑膜组织NLRP3和caspase-1含量。在体外,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)刺激为阳性对照组,以PBS为阴性对照组,不同浓度梯度IL-6、ATP和IL-6/ATP分别刺激J774A.1细胞,流式细胞术检测各组caspase-1活化的细胞比例。利用PBS、IL-6、ATP、及IL-6/ATP,分别刺激J774A.1细胞,蛋白印迹(western blotting,WB)检测J774A.1细胞caspase-1活化,活细胞工作站观察细胞形态,流式细胞术检测细胞死亡类型,ELISA检测J774A.1细胞上清IL-1β。结果:第一部分:siRNA-1干扰效率为80.23%,显著高于其他siRNAs(F=60.64,P<0.01)。病毒滴度为1×10~7TU/ml时,LV-IL6-RNAi感染J774A.1细胞占比为85.89%±2.45%,显著高于其他组(F=70.57,P<0.01),干扰效率约为86.15%。LV-IL6-RNAi组CIA关节炎评分明显低于LV-NC-RNAi组和MTX组(F=22.49,P<0.01)。LV-IL6-RNAi组小鼠血清中IL-6含量显著低于LV-NC-RNAi组和MTX组(F=40.97,P<0.01)。LV-IL6-RNAi组和MTX组小鼠血清中IL-1β和TNF-ɑ含量显著低于LV-NC-RNAi组(F=19.24,P<0.01;F=9.52,P<0.01)。高倍镜下(400×)LV-NC-RNAi组、LV-IL6-RNAi组和MTX组炎症细胞浸润数量分别为213.80±6.76,113.30±6.70,117.20±6.23个,差异具有统计学意义(F=74.75,P<0.01)。第二部分:与LV-NC-RNAi组相比,LV-IL6-RNAi组和健康小鼠踝关节IL-6浸润明显减少,NLRP3和caspase-1含量显著减少(F=47.14,P<0.01;F=33.53,P<0.01)。体外实验,IL-6/ATP共刺激774A.1活化caspase-1细胞占比为93.10%,显著高于IL-6或ATP单药刺激(F=1432.00,P<0.01)。蛋白印迹结果显示IL-6/ATP组J774A.1细胞发生caspase-1活化水平显著高于其他组(F=17.18,P<0.01)。活细胞工作站观察到IL-6/ATP共刺激使J774A.1细胞发生明显核碎裂死亡。流式细胞术证实细胞死亡类型为PI/FAM-FITC双阳性代表的炎性坏死。IL-6/ATP组细胞上清IL-1β含量明显高于PBS组、IL-6组和ATP组(F=987.00,P<0.01)。结论:LV-IL6-RNAi可以有效缓解CIA小鼠的关节炎症,其单次局部注射的治疗效果与MTX多次注射治疗效果相近。小鼠滑膜NLRP3炎性小体的活性随滑膜的IL-6浸润减少而减弱。体外实验发现,IL-6可能经ATP途径激活巨噬细胞NLRP3炎性小体,诱导细胞炎性坏死,释放大量IL-1β,促进炎症发生。