DNA甲基转移酶和糖基化酶是生命体中重要的两种酶。这两种酶的异常表达均会引起DNA碱基变化,甚至导致肿瘤的发生。因此,开发简单、有效的检测甲基转移酶和糖基化酶活性的方法对疾病的诊断和疗效监测具有重要意义。本文基于实时连接酶链式反应（real-time LCR）分别建立了一种检测甲基转移酶和糖基化酶的新方法。具体内容如下:一、基于实时连接酶链式反应检测M.SssI甲基转移酶。我们设计了两条完全互补且中间含5’-CCGG-3’序列的长DNA链T1、T2。当存在M.SssI时,甲基化的长DNA链不会被HpaII识别并切割,它会作为LCR的模板引发LCR反应,荧光染料SYBR Green I嵌入LCR产物中荧光增强。反之无M.SssI甲基转移酶时,无法引发体系中的LCR反应。通过检测荧光强度的变化可实现该方法对M.SssI甲基转移酶活性的检测,线性范围为0.002 U/mL-0.1 U/mL,检出限为0.001 U/mL。该方法还可用于M.SssI抑制剂的筛选,并且适用于复杂的生物样品。我们建立的M.SssI甲基转移酶检测方法设计简单、操作简便、成本低,对于临床诊断和药物开发具有重要意义。二、结合磁分离和实时连接酶链式反应的尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG）通用检测平台。在磁球上修饰含尿嘧啶碱基的DNA底物。在UDG和核酸内切酶IV的作用下,DNA底物被切断释放单链DNA（ssDNA）。经磁分离后ssDNA保留在上清液中,再进行LCR扩增和实时荧光检测。该方法在5×10^-4-5 U/mL UDG浓度范围内具有良好的线性关系,检出限为3x10^-4 U/mL。在该检测平台中,扩增反应和荧光检测同时进行,操作简便、避免了后续污染并拓宽了动态范围。此外,该方法还可以用于评估抑制剂和检测实际样品。因此,该方法为UDG检测和临床诊断提供了新工具。值得一提的是,这种方法还具有潜在的通用性。一方面,LCR方法可以用其他扩增方法代替。另一方面,在对DNA底物进行相应修饰后,该方法可能会扩展到检测多种糖基化酶或其他DNA修复酶,对同一磁球进行不同DNA底物修饰还可实现多重检测。