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本文主要对蛋白核小球藻的培养方式的比较、异养生长条件的建立、藻细胞的干燥方式及细胞中叶黄素的提取与检测进行了研究。 研究了6个小球藻藻株在低糖和高糖浓度下异养生长的规律,从中筛选出1个适合于高细胞浓度异养培养的藻株——蛋白核小球藻15-2070。其摇瓶培养的最高生物量(干重)为19.8g/L,最大比生长速率为0.76d-1,干细胞中叶黄素含量为2.63mg/L。通过14L发酵罐放大培养,确定了分批培养的工艺参数:接种量5%(v/v),温度28℃,搅拌转速200r/min,空气流量4-6L/min。由此得到的最高生物量(干重)为20.1g/L,最大比生长速率为0.82d-1,干细胞中叶黄素含量达到2.83mg/g,均比摇瓶培养高。为了降低成本,以大米糖化醪作为碳源培养蛋白核小球藻,最高生物量(干重)达到了18.3g/L,最大比生长速率为0.80d-1,接近以葡萄糖作为碳源培养时的生长水平,而且叶黄素含量有所提高,达到了2.92mg/g。结果表明,廉价的大米糖化醪可以作为蛋白核小球藻培养的碳源在实际生产中采用。 采用自养、异养、混养三种方式对蛋白核小球藻15-2070进行培养。三种培养方式获得的最高生物量(干重)分别为0.4、19.8、20.9g/L,最大比生长速率分别为0.13、0.76、0.81d-1。由于异养培养成本较低,产量高,不需光照辅助设施,培养条件容易控制,所以适合于规模培养的生产要求。对三种方式培养获得的藻细胞的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、碳水化合物、抗坏血酸、脂肪酸、叶绿素、叶黄素含量进行了测定。并比较了三者之间的差异:异养细胞的粗脂肪、抗坏血酸含量高于自养和混养细胞,而蛋白质含量低于后两者。 小球藻鲜藻经过5种干燥方式干燥后,细胞中热敏成分的含量均有降低。抗坏血酸、总叶绿素和叶黄素降低的范围分别为24.2%-90.9%、22.6%-83.1%、16.7%-81.6%。根据它们降低的程度和实际生产成本,最适宜的干燥方式是喷雾干燥。 蛋白核小球藻细胞中叶黄素提取工艺的研究结果表明:以甲醇/二氯甲烷(∶1,v/v)为提取剂,用细胞破碎器破碎藻细胞,破碎次数2次,破碎时间每次7min,提取的料液比1∶75(w/v),温度30℃,为最卯01硕士学少论丈佳提取条件。在此条件下提取蛋白核小球藻细胞中的叶黄素,提取率达到了92.3%。 采用高效液相色谱法测定了蛋白核小球藻叶黄素的含量,确定了色谱分析条件:样品中叶黄素经提取后,以反相CI,柱为固定相,甲醇/乙睛/水(80:10:10)和甲醇/乙睛(40:60)为流动相,梯度洗脱,用二极管阵列检测器在447nln波长下检测。测定结果表明,叶黄素在O一6Omg/L范围内线性关系良好(r==o.9999),方法精密度的相对标准偏差为0.487%(n=6),平均回收率为99.7%。该方法简便、快速、准确,适合于小球藻叶黄素的定性定量检测。