包含双纤维素结合域(CBD)重组蛋白的分子构建、表达及其吸附性能的研究

来源 :南京林业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:guobin_tj
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纤维素结合域(CBD)是绝大部纤维素降解酶的一个特定区域,它能够特异性的吸附到纤维素上。目前,越来越多的CBD已经从各种纤维素降解酶中分离出来,并且发现它没有水解活性。许多的研究者已经阐述了CBD在生物技术方面具有巨大的潜在应用价值尤其是在纤维修饰及造纸工业上。在本论文中我们根据来源于草菇的三种纤维素降解酶CBD的cDNA序列设计了一系列相互重叠的引物,然后利用PCR引物延伸的方法构建了三种包含双纤维素酶结合域(CBD)的基因片段。通过限制性酶双酶切以后连接,将目的基因片段插入到原核表达载体pet-32a/b从而构建好三个重组表达质粒:dEG1CBD- pet-32b, dcelc12CBD- pet-32a和dcbd3-101CBD - pet-32a,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。通过SDS-PAGE电泳分析发现在37℃条件下三种目的蛋白都是以不溶的包涵体形式存在;而在30℃条件下,dcbd3-101CBD具有较多的可溶性表达,但另外两种蛋白仍然为包涵体。将dcelc12CBD,dEG1CBD蛋白纯化复性后同dcbd3-101CBD蛋白的可溶性部分分别做吸附实验。结果显示三种重组蛋白都能对微晶纤维素进行特异性的吸附,且最大吸附量都在6μmol/g以上。另外还将这三种重组蛋白利用浸没的方法对滤纸进行了处理,检测滤纸的机械性能发现经蛋白处理后滤纸的抗张强度,耐破度及撕裂强度都有了不同程度的改变。因此,本项研究对开发一种新型的纸张增强修饰剂具有重要的意义。
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