【摘 要】
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目的 为本实验基于组织工程室技术,拟通过引入轴心血管,在PRP支架辅助支撑的情况下加入切碎的耳软骨骨块进行体内培养,并观察软骨组织在组织工程室内的生长情况。方法 选取新西兰大白兔48只,随机进行分组,每组6只;制作中空且表面带孔的硅胶组织工程室;分离新西兰兔耳软骨并切割成(约2mm)碎块;应用sonnleitner法制备PRP;A组:将新西兰大白兔自体耳软骨碎块置入硅胶组织工程室。B组:分离股动脉
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目的 为本实验基于组织工程室技术,拟通过引入轴心血管,在PRP支架辅助支撑的情况下加入切碎的耳软骨骨块进行体内培养,并观察软骨组织在组织工程室内的生长情况。方法 选取新西兰大白兔48只,随机进行分组,每组6只;制作中空且表面带孔的硅胶组织工程室;分离新西兰兔耳软骨并切割成(约2mm)碎块;应用sonnleitner法制备PRP;A组:将新西兰大白兔自体耳软骨碎块置入硅胶组织工程室。B组:分离股动脉或腹壁下浅动脉转移至包含自体耳软骨碎块的硅胶组织工程室。C组:将自体耳软骨碎块均匀混合富血小板血浆(PRP)后添加到硅胶组织工程室内。D组:将股动脉或腹壁下浅动脉转移至硅胶组织工程室后再添加均匀混合富血小板血浆(PRP)的自体耳软骨碎块。于术后8周收获标本,观察小室内构建物生长情况,测定构建物体积,留取构建物组织进行石蜡包埋切片,并进行HE染色、Masson染色、番红-O染色、Verhoeff Van-Gieso染色及免疫组化观察构建物的成分、血管化程度、纤维增生情况;通过免疫组化测定细胞增殖区域、细胞外基质成分;通过压缩法测定构建物的弹性模量。结果 硅胶组织工程室内所有组软骨组织均能存活,未见明显坏死或萎缩,经过8周培养后B、C、D软骨组织呈现白色均一的软骨样外观,而A组的软骨碎块未能完全融合。A组组织工程软骨体积从0.3ml增加到(0.9±0.2366)ml,;B组组织工程软骨体积从0.3ml增加到(1.25±0.1517)ml;C组组织工程软骨体积从0.3ml增加(1.207±0.2066)ml。D组软骨体积从0.3ml增加到(1.8±0.1789)ml。四组之间的软骨组织体积差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示所有组软骨碎片周围可见再生软骨细胞和增生的胶原纤维。KI—67免疫组化显示软骨样细胞增殖活跃区域位于切割边缘和软骨组织表面,D组增殖活跃细胞明显较A、B、C三组多。Masson染色、番红O染色及弹力纤维染色显示弹性软骨细胞特异外基质的分泌,实验组均优于A组,其中D组要优于ABC 3组。弹性模量测定显示B、D组软骨弹性模量与正常兔耳软骨差异无统计学意义,A、C组弹性模量与正常兔耳软骨差异有统计学意义。8周后获取的小室外筋膜组织大体观显示,所有实验组的血供均较A丰富,B组及D均可见先前引入的血管蒂,其形成分支并营养整个组织工程构建物。各组血管密度统计显示:实验8周后实验D组血管面积大于实验A、B、C 3组,B、C组血管面积大于A组,各组之间血管计数差异有统计学意义(P<0.05)。B、C两组间血管面积差异没有统计学意义(P>0.05)结论 应用组织工程室技术,添加混合富血小板血浆(PRP)的耳软骨碎块并引入轴心血管,能促进软骨组织生长,从而在较短时间内(8W)获得临床可用的组织软骨。
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