褪黑素通过调节胶质瘤细胞中microRNA-155的表达发挥抑癌作用的机制研究

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【目的】检测经褪黑素处理后的胶质瘤细胞株中microRNA-155(miR-155)的表达情况,探讨褪黑素对胶质瘤细胞增殖、转移和侵袭能力的影响,并探究其抑癌的相关机制。【方法】第一部分:1、选用人脑胶质瘤细胞株U87、U373、U251共三株,分别用不同浓度(100μM、1μM、1nM)的褪黑素处理。运用qRT-PCR技术检测三株胶质瘤细胞中miR-155的表达量相对于对照组的变化。明确褪黑素和miR-155表达量的相关性,并确定引起miR-155表达量变化最大的褪黑素浓度。2、选定一株胶质瘤细胞株,并选用引起miR-155表达量变化最大的浓度范围的褪黑素处理细胞。通过CCK-8方法观察胶质瘤细胞的增殖情况。3、通过流式细胞仪技术检测胶质瘤细胞增殖、细胞周期及凋亡的变化。4、利用Transwell试验检测褪黑素对肿瘤细胞迁移、侵袭的影响。第二部分:1、选定一株胶质瘤细胞,并选取引起miR-155表达量变化最大的浓度范围的褪黑素处理细胞。分别应用Western blot和qRT-PCR技术检测细胞中MYB基因的mRNA及蛋白表达相对于对照组的变化,明确褪黑素与MYB基因的相关性。2、选同一株胶质瘤细胞,将MYB基因干扰后用qRT-PCR技术检测细胞中miR-155的表达量相对于对照组的变化,明确MYB和miR-155的相关性。【结果】第一部分:1、三株胶质瘤细胞U87、U373、U251经过不同浓度(100μM、1μM、1nM)褪黑素处理后,miR-155的表达相对于正常对照组均明显下降(P<0.05),其中用1μM浓度褪黑素处理的细胞株中miR-155表达下降最明显(P<0.01)。2、经过1μM浓度褪黑素处理的U87胶质瘤细胞增殖较对照组明显下降。3、经过1μM浓度褪黑素处理的U87胶质瘤细胞凋亡较对照组增高,而细胞周期没有变化。4、经过1μM浓度的褪黑素处理的U87胶质瘤细胞迁移和侵袭能力较对照组明显下降。第二部分:1、经过1μM浓度褪黑素处理的U87胶质瘤细胞中MYB基因的mRNA和蛋白表达量均明显低于对照组。2、在U87胶质瘤细胞中干扰MYB基因后,miR-155的表达量下降。【结论】本研究结果表明褪黑素通过下调MYB基因从而抑制miR-155表达,1μM浓度褪黑素可以增加肿瘤细胞的凋亡使胶质瘤细胞增殖降低,并且能抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力,进而发挥抑癌作用。本实验阐明了褪黑素在脑胶质瘤中抑癌作用的microRNA表观调控机制,为揭示褪黑素的抗脑胶质瘤作用机制奠定了理论基础,为发现脑胶质瘤的临床治疗靶点提供新思路。
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