【摘 要】
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目的:探讨polo样激酶1(PLK1)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及其基因沉默在NHL治疗中的意义。方法:通过免疫组化检测PLK1和survivin在NHL患者病理切片中的表达,评估其对预后
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目的:探讨polo样激酶1(PLK1)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及其基因沉默在NHL治疗中的意义。方法:通过免疫组化检测PLK1和survivin在NHL患者病理切片中的表达,评估其对预后的提示作用;通过Co-60照射(10Gy)和阿霉素(ADM,0.5μM)作用淋巴瘤细胞系(Jurkat和Raji细胞)模拟DNA损伤模型,流式细胞仪检测细胞周期的改变,激光扫描共聚焦显微镜检测核内γ-Histone H2AX染色,Western blotting(WB)和免疫共沉淀检测PLK1的蛋白水平表达和激酶活性的变化;将特异性针对PLK1 mRNA的siRNA真核载体导入细胞,通过RT-PCR和WB检测转染前后PLK1表达差异,转染后细胞经DNA损伤处理,流式细胞仪检测细胞周期的改变,激光扫描共聚焦显微镜检测核内γ-Histone H2AX染色,AnnexinⅤ/ APC检测细胞凋亡。结果:PLK1和survivin在NHL的表达率分别为63.6%和79.5%。在B细胞NHL(B-NHL)和T细胞NHL(T-NHL)中,PLK1的表达与患者一般状况、LDH水平和IPI评分相关,而survivin的表达与上述指标无显著相关性。在B-NHL和T-NHL中,PLK1的表达提示无病生存期(EFS)缩短,而survivin的表达无提示作用。Cox生存分析证实PLK1的表达为独立的预后影响因子。淋巴瘤细胞经Co-60照射和ADM作用后,细胞周期停滞于G2/M期;核内出现γ-Histone H2AX的表达;PLK1激酶活性下调,蛋白表达不受影响;DNA损伤修复后,γ-Histone H2AX的表达消失,PLK1激酶活性恢复,细胞进入下一个G0/G1期。siRNA-PLK1能有效抑制PLK1 mRNA和蛋白水平的表达,阻止DNA损伤恢复细胞进入下一个细胞周期并诱导细胞凋亡。结论: PLK1异常高表达于NHL,并且提示预后不良。PLK1基因沉默联合化疗/放疗,体外能有效干扰细胞周期进程并诱导细胞凋亡。
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