卵巢癌是常见的女性生殖系统肿瘤，而上皮性肿瘤是卵巢肿瘤中最常见的类型。由于卵巢癌患者确诊时往往已界晚期，难以手术根治。目前临床上治疗卵巢癌主要应用手术治疗、化学药物治疗及放射性治疗这三种疗法，但各种疗法均受各自适应证的限制。因此，关于卵巢癌疗法的探讨仍是目前乃至今后该领域研究的重要课题。近年来，许多学者对应用免疫疗法治疗卵巢癌进行了初步的探讨，但尚未得出肯定结论。本文研究了蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）在卵巢癌中活性及α亚型的变化，从分子生物学的一个侧面初步探讨细胞恶变的奥秘，同时为探讨PKC及其抑制物在抗肿瘤治疗方面的可能性提供了理论依据。 PKC是依赖Ca²⁺、由磷脂（phospholipid，PL）和二酰基甘油（diacylglycerol，DAG）激活的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的多基因超家族。目前共计12种亚型，各种亚型有不同的激活机制，酶学特征、组织表达以及特定的细胞内定位。PKC是由与磷脂、甘油二酯和佛波酯疏水性结合的疏水性调节部位和含有ATP以及底物蛋白结合区域的亲水性催化部位组成。调节部位的功能通常在于通过“关闭”催化中心来灭活PKC。当胞外信息物质与受体结合后，PKC被激活，通过催化多种生理活性蛋白，广泛参与细胞信息传递、分泌、离子通道调节、细胞增殖、分化及癌变等一系列与生命现象有关的过程，因此已成为生物界和医学界的研究热点。国内迄今尚未见到有关卵巢肿瘤组织中PKC变化的报道。 材料与方法一、材料：PKC a一抗及碱磷酶标记的 h抗（购自h gma公司）二、标本采集： 采集中国医科大学附属一院和三院妇科手术切除之新鲜正常卵巢u组)、良性卵巢上皮性肿瘤出组)及恶性卵巢上次性肿瘤C组)组织标本各15例。所有标本均经术后病理证实，并均未经术前放疗、化疗及激素治疗。术中取新鲜组织0．5克左右，立即用冷PBS冲洗，并去除坏死组织，置入液氮中，转运至｛0oC冰箱中贮存。 三、方法： 1、组织标本胞浆、胞膜蛋白的提取： 实验所有操作均在4OC进行。取等重的各样品，加5倍于湿重标本的粉碎缓冲液Buffer A中，以眼科剪刀剪碎组织，冰水浴下以组织匀浆机及超声粉碎机粉碎匀浆。4C下以13000rPm离心1／J’时，取其上清即为胞浆蛋白。 将上述沉淀用4倍于湿重标本的胞膜蛋自提取液，超声粉碎后4 oC过夜，在4 t下以 13000rP。离心 1／J’时，上清即为胞膜蛋白。2、对提取的胞浆蛋白、胞膜蛋白进行蛋白定量 采用 Fo i n法进行蛋白定量。以分光光度计检测光密度值，用标准品进行对照测得样品蛋白浓度。 标准品蛋白浓度（ling砌）X样品光密度值样品蛋白浓度—～ 标准品光密度值3、PKC上活性测定 2 采用同位素放射免疫结合实验技术，以Bec恤an液问计数议测定其放射活性cPm值。按下列公式计算PKC比活性＊ 冶．mh－‘人 样品的PKC放射活性cpm值X ATP含量（巨2．5 X 10－’mol） 总放射活性cpm值X反应时间门分钟)X蛋白含量hg) ［蛋白含量hg)一样品蛋白浓度加g加)X 0．02h川4、PKC a亚型分析 采用Western blot法。结果采用凝胶成像及分析系统，利用扫描后的影像进行量化分析，得到各样本等面积下的积分密度值 门DV)，该值与PKC亚型的表达情况成反比。5、统计学处理 本实验数据采用 SAS6．12进行方差分析，并采用 SNK州检验在各组之间进行两两比较。 结果一、PKC活性的比较 恶性卵巢上皮性肿瘤组胞膜及胞浆中蛋白激酶C活性较正常卵巢组及良性卵巢上次性肿瘤组升高，差异显著①．01厂 而良性卵巢上次性肿瘤组胞膜及胞浆中蛋白激酶C活性与正常卵巢组比较，无显著差异 仔＞0．05八二、PKC a亚型的比较分析 良恶性卵巢上应性肿瘤及正常卵巢组织的胞浆、胞膜中均含有PKC－a。恶性卵巢上皮性肿瘤组胞膜及胞浆中PKC a亚型含量较正常卵巢组及良性卵巢上应性肿瘤组增多，差异显著①＜0．01厂 而良性卵巢上次性肿瘤组胞膜及胞浆中 PKC a亚型与正常卵巢组比较，无显著差异c＞0．05厂 3 讨论 卵巢癌的发生源于癌基因如ras、myc等的激活及抑癌基因如P”等的失活。许多癌基因在自身激活同时激活PKC，从而全部或部分依赖PKC信息通路导致细胞恶变，被活化的PKC能迅速引起细胞核肿瘤蛋白的磷酸化，活化相应的转录因于，从而在转录水平或翻译水平调控癌基因产物，导致细胞分裂通路的紊乱。一般认为癌基因作用下PKC的变化是细胞恶变的早期反应。在此基础上，细胞一旦经促癌物质等其他致癌因素的长期作用，便会跨越其遗传学及生化学改变阶段，进入形态改变期，导致癌的发生。研究早已证明，PKC是促癌物质伯 TPA)的受体，促癌物质直接活化PKC，促进细胞恶变。木实验中，恶性卵巢上度肿瘤胞浆及胞膜