油茶种质资源RAPD分析

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laotzu123
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该研究利用RAPD标记技术分析了90份油茶品种及无性系的DNA多态性,对品种间的亲缘关系和遗传多样性进行了分析,同时还对一些农艺性状(果油率、产油量和抗病性等)与分子标记进行了相关分析,并对生产上常用的18个无性系编写了分子检索表.获得的主要结果如下:(1)获得了用于油茶RAPD分析的DNA提取液的优化配方和适合的DNA提取操作程序.(2)研究采用的RAPD反应和扩增程序,经优化后确定为:20μl体系中含20ng模板DNA、1×PCR缓冲液、1.75mM/L的Mg<2+>、0.1mM/L的dNTPs、1.0UTaq DNA聚合酶、73.3pmole引物;扩增程序为95℃预变性3分钟,然后进入40个循环,每个循环包括94℃变性1分钟,40℃退火1分钟,72℃延伸2分钟,循环完毕后72℃延伸7分钟.(3)从266条10聚体核苷酸随机引物选取出扩增结果具有丰富多态性的18条引物对油茶品种及无性系进行了DNA分子标记分析.这18条引物对90份样本共扩增出601条谱带,其中多态性谱带569条,多态比率达94.68%,表明油茶品种间存在丰富的遗传多样性;在601条谱带中特异性谱带(包括特异性缺失谱带)有32条,占总谱带的5.32%,这些特异性谱带(包括特异性缺失谱带)对于进行油茶品种及无性系的鉴定具有重要意义.(4)探讨了不同引物数量、不同多态比率和不同丰富度谱带对油茶种质资源聚类分析的影响,表明油茶的聚类准确度与引物数量、引物的带型数有关,多态比率不是选用引物的主要标志.在用RAPD技术对油茶种质资源进行遗传关系分析时,有必要保证一定数量的引物且引物具有丰富的带型.(5)以抗病性、果油率和产油量三个农艺性状与对相应的谱带进行相关分析,结果是75条谱带与抗病性显著相关(29条为极显著相关);148条谱带与果油率显著相关(76条为极显著相关);203条谱带与产量显著相关(103条为极显著相关).这些与抗病性、果油率和产量等数量性状相关谱带的确定可为选育丰产、抗病、优质的油茶品种,缩短育种进程,提高育种效率,还能进一步为实现油茶良种化提供理论依据,对油茶种质资源的保护和合理开发利用也提供科学的依据.(6)依据RAPD扩增产生的这些特异性(特异性缺失谱带),对生产上常用的18个油茶无性系,编写了分子标记检索表.
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