利用阳离子脂质体Lipofectamine 2000与pBac[A3Neo+A3EGFP]表达载体，对BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf21四种细胞系进行了DNA量、脂质体量、血清含量和转染细胞的密度及转染细胞与转染液孵育时间等五个转染条件的优化实验，同时选择转染效率最高的BmN-SWU1细胞用G418进行筛选，完成了转基因细胞的建立。其主要研究结果如下： 1．DNA量的优化。优化时在五个培养孔中分别接种密度为2×10<5>个/mL 的细胞悬液0.5 mL，每孔加入2μl脂质体，DNA量殴置了0.4 μg、0.6/μg、0.8μg、1.0μg和1.2μg五个质量梯度，无血清转染，转染24 h后移除转染液。优化后得到了BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf21四种细胞系的最优DNA量分别为0.6μg、0.4μg、1.0μg和0.6μg。 2．脂质体量的优化。优化时在细胞培养板的五个培养孔中分别接种密度为 2×10<5>个/mL的细胞悬液0.5 mL，每孔加入0.6μg质粒DNA，脂质体量设置了1.0μl、1.5μl、2.0μl、2.5μl和3.0μl五个体积梯度，无血清转染，转染24 h后移除转染液。优化后得到了BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf21四种细胞系的最优脂质体量分别为2.5μl、1.5μ1、3.0μl和3μl。 3．被转染细胞密度的优化。在细胞培养板的培养孔中分别接种密度为0.5×10<5>个/mL、1×10<5>个/mL、2×10<5>个/mL、3×10<5>个/mL和4×10<5>个/mL的BmN-SWU1、BmN和Sf21细胞0.5 mL，优化BmN-SWU2时，在培养孔中分别接种密度为1×10<5>个/mL、2×10<5>个/mL、3×10<5>个/mL、4×10<5>个/mL和5×10<5>个/mL的细胞0.5 mL。每孔加入0.6μg质粒DNA，2μl脂质体，无血清转染，转染24 h后移除转染液。优化后得到了BmN-SWUI、BmN-SWU2、BmN和Sf21等四种细胞系的最优被转染细胞密度分别为1×10<5>个/mL、5×10<5>个/mL、2×10<5>个/mL和0.5×10<5>个/mL。 4．共转染时间的优化。在培养孔中分别接种密度为2×10<5>个/mL的BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf21细胞悬液0.5 mL，每孔加入0.6μg质粒DNA，2μl脂质体，无血清转染，转染后于6h、12 h、18 h、24 h和30h时移除转染液。优化后得到了BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf21四种细胞系的最优共转染时间分别为24 h、6 h、24 h和12 h。 5．转染液中血清含量的优化。在培养孔中分别接种密度为2×10<5>个/mL的BmN-SWU1、BmN和Sf21细胞悬液0.5 mL，分别加入无血清和有血清(5％)转染液；而优化BmN-SWU2时，在培养孔中分别接种密度为2×10<5>个/mL的BmN-SWU2细胞悬液0.5 mL，分别加入含2.5％、5％、7.5％、10％和12.5％血清的转染液。每孔转染液中加入0.6μg质粒DNA，2μl脂质体，转染24 h后移除转染液。优化后得到了BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf21四种细胞系的转染最优血清条件分别为无血清、5％血清、无血清和5％血清。 6．在BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf21四种细胞系各自最优条件下转染细胞，得到了四种细胞系的最高瞬时转染效率分别为55.08％、8.29％、2.0％和11.66％。 7．选用瞬时转染效率最高的BmN-SWU1细胞转染后用G418筛选，构建的BmN-SWU1的(3418致死曲线表明，300 μg/mL是BmN-SWU1细胞对(3418的最小致死浓度。用400μg/mL的G418筛选转基因细胞14 d，得剑了转基因细胞占60％以上的转基因细胞群体。挑取转基因细胞群体用200μg/mL的G418筛选五个月左右，得到转基因细胞占95％以上的转基因细胞群体。目前，转基因细胞群体已连续传至15代，且能在6-8 d传代一次，与未转染的BmN-SWU1细胞传代时间相当。 本研究优化了阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和Sf2四个细胞系的转染条件，建立了阳离子脂质体转染家蚕细胞的技术体系，其中BmN-SWU1细胞系的最高转染效率达到55.08％，并且筛选出了转基因细胞占95％以上的BmN-SWU1细胞的转基因细胞系，为分析家蚕转基因载体的表达和家蚕工程细胞系的建立奠定了基础。