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第一部分鼻咽癌中NGX6蛋白的表达及其意义目的:研究鼻咽癌中鼻咽癌相关基因6(nasopharyngeal carcinoma associatedgene 6,NGX6)在蛋白水平的表达,及其与年龄、性别、淋巴结转移以及T、N和临床分期等因素的关系。方法:实验一采用EnVision二步法(Enhance Labelled Polymer System,ELPS法)进行免疫组化染色,检测20例鼻咽部非肿瘤性上皮组织(A组)、32例不伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(B组)及48例伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(C组)中NGX6蛋白的表达情况;结合患者年龄、性别、淋巴结转移、T、N分期和临床分期等多个因素,分析NGX6蛋白表达在鼻咽癌发生及发展进程中的意义。实验二采用Western Blot法,检测4例鼻咽部非肿瘤性上皮组织(A组)、6例不伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(B组)及10例伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(C组)中NGX6蛋白的表达情况;分析NGX6蛋白表达与鼻咽癌淋巴结转移的关系。结果:实验一中NGX6蛋白的免疫阳性产物为棕黄色颗粒,定位于鼻咽部上皮细胞和肿瘤细胞的细胞膜和细胞浆内。A、B、C三组中NGX6蛋白阳性表达率呈逐级下降趋势。非鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率为85%(17/20),明显高于鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率52.5%(42/80),差异有统计学意义(Χ2=6.9864,P<0.01);非转移鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率为68.75%(22/32),明显高于转移鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率41.67%(20/48),差异有统计学意义(Χ2=5.6475,P<0.025)。实验一鼻咽癌组织中T2期和T3/4期的NGX6蛋白阳性表达率(45.24%、18.18%)均较T1期(77.78%)明显降低(P<0.01,P<0.005);但是T2期和T3/4期鼻咽癌的NGX6蛋白阳性表达率无显著性差异(P>0.05)。N2/3期的NGX6蛋白阳性表达率(26.92%)较N0和N1期的NGX6蛋白阳性表达率(68.75%、59.09%)均明显降低(P<0.005,P<0.025);但是N0期和N1期鼻咽癌的NGX6蛋白阳性表达率无显著性差异(P>0.05)。Ⅲ/Ⅳ期的NGX6蛋白阳性表达率(36.37%)较Ⅰ/Ⅱ期(72.22%)明显降低(P<0.005)。此外,鼻咽癌中NGX6蛋白阳性表达率在不同性别及年龄间无显著差异(P>0.05)。实验二A、B、C三组中NGX6蛋白的相对积分光密度值呈逐级下降趋势,三组间差异有显著性(F=38.02,Pr<0.0001);非鼻咽癌组的NGX6蛋白的相对积分光密度值(0.9098±0.2673)高于非转移鼻咽癌组(0.3218±0.2003)(P<0.05),而非转移鼻咽癌组的NGX6蛋白的相对积分光密度值(0.3218±0.2003)高于转移鼻咽癌组的NGX6蛋白的相对积分光密度值(0.0875±0.0432)(P<0.05)。结论:鼻咽癌中NGX6在蛋白水平存在表达下调,并且其下调程度与淋巴结转移相关,鼻咽癌中NGX6蛋白表达越低,预示着淋巴结转移的发生率越高;鼻咽癌中NGX6蛋白的表达与淋巴结转移、T分期、N分期及临床分期均显著相关,但是与患者年龄和性别无关。因此,NGX6蛋白的检测有可能有助于鼻咽癌淋巴结转移风险的预测,并有利于预后的判断。第二部分NGX6蛋白表达与LMVD的关系目的:研究鼻咽组织中NGX6蛋白表达与微淋巴管密度(lymphatic microvessel density ,LMVD)的相关性,探讨NGX6对肿瘤淋巴管生成可能存在的调节作用。方法:材料来源同第一部分实验一。采用EnVision二步法进行D2-40的免疫组化染色,计算各样本的淋巴管密度;分析LMVD与NGX6蛋白表达的相关性。结果: D2-40免疫阳性产物为棕黄色颗粒,定位于淋巴管内皮细胞的细胞浆中。A、B、C三组的LMVD值呈逐级上升趋势,非鼻咽癌组的LMVD值(3.45±1.94)低于非转移鼻咽癌组(6.02±2.96),非转移鼻咽癌组的LMVD值低于转移鼻咽癌组(10.99±5.10),三组间差异有显著性(F=29.98,Pr<0.0001)。NGX6蛋白表达与LMVD值存在明显的负相关(rs=-0.73221,P<0.0001),NGX6蛋白表达水平越高,LMVD值越小。结论:鼻咽癌中LMVD增高,并且其增高程度与淋巴结转移相关,鼻咽癌中LMVD越高,预示着淋巴结转移的发生率越高;鼻咽癌中LMVD与NGX6蛋白表达呈显著负相关,提示NGX6的表达缺失和高LMVD在鼻咽癌的发展中起协同作用,且NGX6可能具有抑制肿瘤淋巴管生成的作用。第三部分NGX6蛋白表达与VEGF蛋白表达的关系目的:研究鼻咽组织中NGX6蛋白与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的相关性,探讨NGX6对鼻咽癌细胞中VEGF蛋白表达可能存在的调节作用。方法:实验一材料来源同第一部分实验一。采用EnVision二步法进行免疫组化染色,检测并分析各组鼻咽组织中VEGF蛋白的表达情况;分析VEGF蛋白表达与LMVD的相关性;分析VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达的相关性。实验二材料来源同第一部分实验二。采用Western Blot法,检测并分析各组鼻咽组织中VEGF蛋白的表达情况;分析VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达的相关性。结果:实验一中VEGF蛋白免疫阳性产物为棕黄色颗粒,定位于鼻咽部上皮细胞和肿瘤细胞的细胞浆内。A、B、C三组中VEGF蛋白阳性表达率呈逐级上升趋势。非非鼻咽癌组的VEGF蛋白阳性表达率为55%(11/20),明显低于鼻咽癌组的阳性表达率86.25%(69/80),差异有统计学意义(Χ2=9.7656,P<0.005);非转移鼻咽癌组的VEGF蛋白阳性表达率为78.13%(25/32),明显低于转移鼻咽癌组的阳性表达率91.67%(44/48),但是差异无统计学意义(Χ2=2.9688,P>0.05)。VEGF蛋白表达与LMVD值存在明显的正相关(rs=0.73332,P<0.0001),VEGF蛋白表达水平越高,LMVD值越大。VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达呈显著负相关(rs=-0.59988,P<0.0001),NGX6蛋白表达水平越低,VEGF蛋白表达水平越高。实验二中A、B、C三组中VEGF蛋白的相对积分光密度值呈逐级增加趋势,三组间差异有显著性(F=20.13,Pr<0.0001);非鼻咽癌组的VEGF蛋白的相对积分光密度值(0.5419±0.1993)低于非转移鼻咽癌组的相对积分光密度值(1.3748±0.366(P<0.05),非转移鼻咽癌组的VEGF蛋白的相对积分光密度值(1.3748±0.3665)低于转移鼻咽癌组的相对积分光密度值(1.9939±0.4506)(P<0.05)。VEGF蛋白与NGX6蛋白的相对积分光密度值呈显著负相关(r5)s=-0.80902,P<0.0001),随着NGX6蛋白相对积分光密度值越低,VEGF蛋白相对积分光密度值越高。结论:鼻咽癌中存在VEGF蛋白过度表达,并且其表达程度与淋巴结转移相关,鼻咽癌中VEGF蛋白表达越高,预示着淋巴结转移的发生率越高;鼻咽癌中VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达呈负相关,提示NGX6的表达缺失和VEGF的高表达在鼻咽癌的发展中起协同作用,VEGF表达可能受抑癌基因NGX6的负调控;鼻咽癌中LMVD值与VEGF蛋白表达呈正相关,进一步验证了VEGF对肿瘤淋巴管生成的促进作用。因此,联合检测NGX6蛋白、VEGF蛋白和LMVD可能更加有助于鼻咽癌淋巴结转移风险的预测,以及预后的判断。