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目的：通过体外培养原代人眼Tenon’s囊成纤维细胞（Human Tenon’s capsulefibroblasts,HTFs），观察不同浓度的羟基喜树碱（HCPT）对HTFs的影响，并初步探讨其可能的作用机制。方法：1、HTFs的体外培养和鉴定：取捐赠的离体眼球（24小时内）周边新鲜的Tenon囊组织，采用组织块培养法，进行成纤维细胞的体外培养，免疫荧光观察鉴定成纤维细胞；2、Hoechst凋亡染色测定不同浓度的羟基喜树碱对HTFs细胞有无诱导凋亡作用；3、MTT法检测不同浓度的羟基喜树碱（0、0.06、0.25、1、4mg/L）作用成纤维24h、48h、72h后的OD值变化，并与加入caspase广谱阻断剂（Z-VAD-FMK）后测得的OD值作对比，观察OD值的变化，分析HCPT可能的作用机制；4、Western Blot法检测不同浓度的羟基喜树碱作用人眼Tenon囊成纤维细胞24小时后，凋亡蛋白caspase-3，-8，-9量的变化；5、半定量RT-PCR检测0.25mg/L羟基喜树碱作用成纤维细胞24小时后mRNA水平caspase-3，-8，-9量的变化；6、Western Blot法检测0.25mg/L浓度时的羟基喜树碱，0.25mg/L浓度的羟基喜树碱+caspase广谱阻断剂（Z-VAD-FMK，HCPT加入前2小时加入）混合液中凋亡蛋白caspase-3，-8，-9量的变化，并初步探讨羟基喜树碱诱导成纤维细胞可能的作用机制。结果：1、原代培养的成纤维细胞,空间充足是多呈放射状生长；而空间狭小时呈横向生长；HTFs波形蛋白抗体染色阳性、角蛋白抗体染色呈阴性，从而证明了培养的细胞为成纤维细胞；2、Hoechst凋亡染色显示不同浓度的HCPT作用成纤维细胞24h后，随着HCPT浓度的增加，凋亡细胞的数量逐渐增多，差异有统计学意义（P<0.05）；3、MTT法显示不同浓度的HCPT作用24h、48h、72h后HTFs细胞的增值率低于空白对照组，除了0.06mg/LHCPT与空白组之间无统计学意义外，其余各组与空白组之间的差异均具有统计学意义，并体现一定范围内的浓度依赖性；另外各浓度组作用24h、48h、72h之间的OD值具有统计学意义，体现了时间依赖性；同时空白组与HCPT+Z-VAD-FMK组之间的OD值却无统计学差异，说明Z-VAD-FMK可以抑制由HCPT引起的凋亡；4、Western Blot法结果显示：与空白组相比较，随着HCPT浓度的增加，蛋白caspase-3，-9量逐渐增多；而各浓度组之间caspase-8的量却无明显的变化；5、半定量RT-PCR检测0.25mg/L羟基喜树碱作用成纤维细胞24小时后mRNA水平caspase-3，-9量较空白组增多，caspase-8的量较空白组反而下降；但是加入caspase广谱阻断剂后caspase-3，-8，-9量的均降低；6、Western Blot法结果表明0.25mg/L羟基喜树碱作用成纤维细胞24小时后，凋亡蛋白caspase-3，-9的量较空白组增多，而caspase-8的量较空白组反而下降；但是加入caspase广谱阻断剂后caspase-3，-8，-9蛋白的量均降低；结论：1、羟基喜树碱能够诱导HTFs凋亡，这种效应呈剂量依赖性；2、羟基喜树碱对体外培养HTFs的增殖有明显的抑制作用，呈现出时间和浓度依赖性；3、mRNA和蛋白水平结果相一致，均证实了羟基喜树碱促HTFS凋亡通过激活了caspase-3,-9途径来实现，并未激活capse-8途径。