猪腮腺分泌蛋白表达特性及表达调控元件的研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:InsidedotNET
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
腮腺分泌蛋白(PSP)由于它的功能与免疫相关,引起了人们的关注。为了弄清PSP的表达情况,以及它与α-AMY(α-Amylase)表达的关系,本研究根据已知的cDNA序列设计引物,利用RT-PCR、荧光定量PCR(Q-PCR)对猪及小鼠的PSP、AMY在腮腺生后发育不同时期的表达情况进行了研究。结果表明,猪与小鼠的PSP在腮腺生后发育的各时期都是高效表达的,而且PSP的表达量随发育期呈动态变化;并且与AMY的变化方向一致,推测二者存在协同性表达。随后的Northern杂交和Western杂交证实了,PSP在mRNA水平和蛋白水平也是高效表达的。   对猪PSP的全长氨基酸序列进行了抗原决定簇分析,推测猪PSP有4个抗原决定簇,分别位于PSP蛋白的22-37aa,41-59aa,180-195aa以及C-端。经过比较,按其中之一合成短肽,将短肽与匙孔血蓝蛋白连接,免疫家兔,获得了抗猪PSP抗血清。从蛋白质水平对其表达情况进行了研究。在整个研究过程中,将a-唾液淀粉酶及三磷酸甘油醛脱氢酶的表达情况作为对照。研究发现PSP在猪及小鼠中都呈腮腺特异性高效表达,表达量在不同发育期呈动态变化,且始终高于GAPDH。并且在6周龄小鼠腮腺中发现了一个20KDa的蛋白,能与PSP抗体发生反应。   在第二部分中,首先利用RLM-5’RACE进行了猪PSP转录起始位点的定位,结果表明,通过RLM-5’RACE得到的序列比现有的cDNA序列的5’端长39个碱基。分析发现,现有的猪PSP基因的开放阅读框(ORF)有误,猪ORF的真正起点(ATG)是在现存5’端上游22个碱基处。   随后用瞬时转染法对功能性启动子进行定位。首先成功地将普通转染载体改造为启动子分析专用载体。利用一系列嵌套引物对启动子区片段进行了扩增、克隆、亚克隆,成功构建了含有不同长度5’调控区的细胞转染载体。
其他文献
了解人工治理小流域的植被恢复状况,对总结黄土高原丘陵沟壑区植被恢复与重建的成功经验具有重要意义.本文选择高泉小流域的主体区域高泉后湾,沿海拔在沟谷(2200-2245m)、东
本研究对宁夏南部半干旱黄土丘陵区植被恢复过程中封育草地的土壤水分物理特性,土壤水分亏缺,及土壤水分时空动态等特征进行了系统测定并对土壤水分变化特征进行了综合的评价
中国从1922年出现高中,至今正好是80年。80年来,中国高中教育有了飞速的发展。1949年中华人民共和国建立时,我国高中在校学生为31.8万人。截止2000年,我国高中在校学生已达2500万,是1949年高中生总数的78.6倍。进入
microRNA(miRNA)为一类单链短非编码RNA,其长度约为20-25 nt,主要通过与靶mRNA的3’端非编码区相结合从而抑制靶基因的表达或翻译,在基因的转录后水平对靶基因发挥调控作用。
学校德育中的形式主义、经验主义、教条主义等不良教风和学风,严重影响着育德的实效,青少年道德情感的纯洁性以及信仰、理想、生活道德都不同程度地发生了危机.学校德育在多
新世纪伊始,我国加入了世界贸易组织,对外开放进入了新阶段,教育改革与发展进入了新时期,教育国际合作与交流空前活跃.在此新形势下,全国教育外事工作会议于7月初在北京成功
近几年来,PCEC为越来越多的上海市民所熟悉和提及:紧缺人才培训基地--PCEC,外语中高级口译岗位资格证书--PCEC,中外合作办学--PCEC……
以多媒体和国际互联网为代表的当代信息技术,正以惊人的速度改变着人们的生存方式和学习方式,并导致发达国家和地区的教育越来越走向网络化、虚拟化、国际化、个性化.这对我
一、高职教育面临的新态势1)技术的空前发展20世纪特别是40年代以来,技术的发展呈现出三个特征:(1)技术发展速度愈来越迅猛。(2)现代技术的发展不断走向整体化。(3)技术的复杂性与精确度愈来愈
高等职业技术教育(以下简称高职教育)的培养目标与专业人才培养模式的基本特征决定了从事高职教育的专业教师必须是“双师型”教师,这已成为共识.