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目的:本研究通过观察不同炮制工艺熟地黄水提液对雌性大鼠排卵功能的影响,采用阴道细胞涂片观察动情周期,取双侧卵巢作病理学形态检查,ELISA技术检测血清中雌二醇（E2）,孕酮（P）激素的含量,比较不同炮制工艺熟地黄补肾促排卵药效的差异。同时基于反相高效液相色谱技术,测定两种炮制工艺的熟地黄的主要化学成分（毛蕊花糖苷、5-羟甲基糠醛、益母草苷）含量。建立熟地九蒸九晒炮制过程特征图谱,采用双变量相关分析法谱效结合探讨两种炮制工艺熟地黄与排卵相关联的药效物质。本研究结合化学与药理学研究数据,比较熟地九蒸九晒与一次性蒸制炮制工艺的优越性,为熟地黄遵古法九蒸九晒炮制的科学内涵提供实验数据,对于临床用药保证熟地饮片的炮制质量具有一定的指导意义。方法:1熟地黄古今炮制工艺考察与药材炮制通过本校图书馆查询历代炮制相关的中医药古籍、各省市地区中药材炮制规范、《中药炮制学》教材及实地调研部分药厂取得熟地黄炮制的相关资料,结合实验室自身设施条件,在炮制学教研室夏荃副教授指导下制定本实验研究的熟地黄清蒸法与传统法两种炮制工艺,开展熟地黄炮制实验。2两种炮制工艺熟地黄影响大鼠排卵功能的药效学研究选取正常雌性成年大鼠,随机分为空白组、清蒸组和传统组。给药组分别按3.6 g·kg-1灌胃熟地黄水提液,空白组给予等量生理盐水。观察两种炮制工艺熟地黄的水提液对雌性大鼠动情周期、卵巢组织形态学及血清激素含量的影响,探究不同炮制工艺的熟地黄水提液对雌性大鼠排卵功能的影响。3两种熟地黄主要化学成分含量测定通过水提醇沉法,除去多糖及糖类的干扰,制备熟地黄水提液。基于反相高效液相色谱仪技术,建立清蒸法与传统法两种熟地黄主要化学成分毛蕊花糖苷、5-羟甲基糠醛、益母草苷HPLC含量测定方法,分别测定水提液中三种化学成分的含量变化。4熟地黄九蒸九晒炮制过程特征图谱建立与谱效学研究通过水提醇沉法,除去多糖及糖类的干扰,制备熟地黄水提液。基于反相高效液相色谱仪技术,对两种熟地黄药材及九次蒸晒过程做指纹图谱研究,以观察熟地黄化学成分在炮制过程当中的变化规律。针对指纹图谱各特征色谱峰面积与药效学指标采用谱效关系结合手段,探究两种炮制工艺熟地黄中与排卵相关的有效物质。结果:1.熟地黄古今炮制工艺考察与药材炮制经查阅熟地炮制相关文献,在炮制教研室夏荃副教授的指导下,本实验制定了清蒸法熟地黄工艺为隔水一次性清蒸12 h取出,烘箱60℃干燥,烘干时间为4 h,切2-4 mm厚片,密封保存。传统法炮制工艺:隔水蒸6 h,取出放置于阴凉处,翌日在阳光充足之处晒至7小时,第二次蒸之前,拌入上一次因蒸汽而产生的地黄汁,再次蒸6 h,如果反复8次,一共9次,切2-4 mm厚片,密封保存。传统法熟地黄乌黑发亮,油性有光泽,味甘若饴。清蒸法熟地黄,甜中发酸,光泽不明显,黑色尚浅,尚未达到甘之若饴的地步,苦味明显。2.两种炮制工艺熟地黄影响大鼠排卵功能的药效学研究大鼠阴道涂片共记录4个性周期,结果显示传统组、空白组性周期变化不明显,平均天数为4.3天,而现代组动情周期在第2个性周期后逐渐增加,平均天数分别为4.50、5.83、7.00、7.17天,明显高于传统组与空白组（P<0.05）。病理组织形态学检查示传统组和空白组的卵泡形态正常,黄体和次级卵泡清晰可见。与空白组比较,现代组闭锁卵泡较多,且黄体和次级卵泡模糊不清（P<0.05）。现代组、传统组、空白组闭锁卵泡数分别为4.0±0.6,2.2±0.5,2.3±0.5个。ELISA法检测大鼠血清中雌激素和孕酮含量,与空白组比较,现代组的雌激素、孕激素含量均明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,传统组性激素水平与空白组相比,没有差异。3.熟地黄中毛蕊花糖苷、益母草苷与5-HMF含量测定研究通过水提醇沉除多糖方法制得两种炮制工艺清蒸法熟地黄与九蒸九晒熟地黄水提液,样品中毛蕊花糖苷的质量分数分别为0.097%、0.033%,5-HMF的质量分数分别为0.15%、0.66%,样品中益母草苷的质量分数分别为0.587%、0.209%。4.熟地黄炮制过程指纹图谱考察与谱效学研究建立熟地黄炮制过程中一蒸一晒到九蒸九晒9个样品、现代清蒸法熟地黄和生地黄样品共11批样品的特征指纹图谱。观察到共有峰9个,其中2、3、4、5号峰峰面积总体趋势随炮制次数增加而增加。6、7、8、9号峰在炮制初期峰面积值最大,1号峰峰面积变化不明显。将清蒸组与传统组共有峰峰面积与药效学中阴道涂片结果中动情周期及闭锁卵泡数据相结合,采用双变量相关分析法进行谱效学研究,结果表明1、8号峰与抑制排卵正相关,3、4、5号峰与抑制排卵负相关。结论:查阅文献得知自汉以来熟地传统以九蒸九晒为主要炮制工艺,而现代熟地黄饮片以传统工艺进行炮制的较少。在药材外观口味评价上九蒸九晒熟地黄更具优势。清蒸法炮制的熟地黄对正常雌性大鼠的排卵有一定抑制作用,传统法熟地黄在促排卵功能上有一定优势。不同工艺炮制后,熟地黄主要化学成分毛蕊花糖苷、5-HMF等发生明显变化,谱效学研究表明相关化学成分与现代清蒸法熟地抑制排卵存在一定联系。