烟草西柏三烯二醇检测方法及其积累动态、分布研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tiantanghao001
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西柏三烯二醇(CBT-二醇)是烟草腺毛分泌物中含量最丰富的化合物,CBT-二醇不仅是卷烟香气的重要前体物质,还具有抗肿瘤、神经保护剂、抑菌、杀虫等多种生物活性。本研究以建立高通量CBT-二醇检测技术,寻找富含CBT-二醇的烟草资源为目标,优化了鲜烟叶CBT-二醇提取方式,分别研究了烟草CBT-二醇的液相色谱检测技术以及CBT-二醇与烟草其他活性成分(维生素E、植物甾醇)的同时提取、气质联用检测技术,开展了CBT-二醇在烟草不同器官中分布、积累动态及在烟草类型、品种间含量差异研究。主要结果如下:1.采用半叶法研究了鲜烟叶干燥、粉碎后提取、测定CBT-二醇含量与传统溶剂洗刷法的差异。结果显示:鲜烟叶45-70℃条件下烘干或冷冻干燥后粉碎,然后用溶剂提取并测定CBT-二醇含量,与传统的溶剂洗刷法相比,二者测定结果无显著差异,且该方法更节约溶剂,方便批量操作。2.超高效液相色谱检测烟草α-CBT-二醇、β-CBT-二醇样品前处理条件及步骤为:以乙酸乙酯为萃取剂,料液比为1:50,超声频率为45KHz,室温提取10min,离心后取1m L提取液,氮气吹干,用2m L75%甲醇溶解获得待测液;色谱条件为:以BEH C18(1.7um 2.1*50mm)为分离色谱柱,以75%甲醇为流动相,流速0.3L/min,柱温35℃,检测波长200nm。方法加标回收率及精密度测试符合定量分析要求,且方法操作步骤简单、溶剂用量少,检测周期短。3.在单因素试验的基础上,通过正交试验建立了气质联用法同时检测烟草CBT-二醇与维生素E、植物甾醇的样品前处理条件:称取样品0.1g,加入等量维生素C作为抗氧化剂,以2mol/L氢氧化钾的95%乙醇溶液作为提取剂及皂化剂(料液比30:1),超声条件下60℃提取、皂化40min,皂化完成后加入5m L正己烷及6倍皂化剂体积的水,使正己烷萃取的目标化合物与皂化剂及其他水溶性杂质分离;同时建立了气质联用测定目标化合物的仪器条件。该方法加标回收率及精密度测试符合定量分析要求,操作步骤简单,适用于高通量检测。4.NC89、CF87品种不同部位烟叶CBT-二醇含量均在开花期呈显著降低趋势,打顶后,中、上部叶CBT-二醇含量呈先升高后降低的趋势。随烟株生长,NC89、CF87品种烟株CBT-二醇积累量均呈先升高后降低的趋势,在开花期或打顶后2周积累量达最大值。5.CBT-二醇在烟草不同器官或组织中的含量顺序为:花>叶>主脉>茎。其中,烟草花萼含量大于花瓣,烟花在蕾期含量最高,烟花开放后其含量降低,不同部位叶片CBT-二醇含量顺序为:上部叶>中部叶>下部叶。6.根据484份不同类型烟花中α、β-CBT-二醇含量分析结果,烟花中α、β-CBT-二醇及其总量分别为(0.84±0.414)%、(0.46±0.22)%、(1.306±0.64)%,烟花中CBT-二醇含量最高达3.98%。不同类型烟花CBT-二醇含量顺序为:烤烟>晒烟>香料烟>雪茄烟>白肋烟>黄花烟,同类型不同品种烟花α、β-CBT-二醇含量也存在较大变异。
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