目的:临床上,肺炎克雷伯菌的分离率排在第二位,仅次于大肠埃希菌。近年来,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率逐年上升,给临床治疗该菌引起的感染提出新的挑战。因此,迫切需要寻找有效的抗菌药物以解决临床问题是本研究的核心内容。青蒿琥酯作为一种抗疟药物,在其他感染性疾病中也具有一定的药理作用。本研究旨在探究青蒿琥酯或其联合抗菌药物对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的抗菌作用及其可能的作用机制,以评估青蒿琥酯潜在的临床应用价值,为青蒿素类药物用于碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌治疗提供实验依据。方法:1、收集南华大学附属长沙中心医院2018年临床分离出的肺炎克雷伯菌菌株资料,使用WHONET软件对其来源、分布、以及耐药情况进行统计分析。从中收集并保存32株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌菌株;2、采用MTT比色法检测不同浓度药物对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的活性作用;3、采用细菌动态生长曲线法观察青蒿琥酯与头孢菌素等各类药物联合作用时对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的生长影响;4、采用微量肉汤稀释法检测青蒿琥酯单独或联合头孢菌素等各类药物对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的抗菌作用;5、采用细菌菌落计数法观察蒿琥酯联合头孢菌素类药物对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的抗菌作用;6、采用qRT-PCR技术检测外排泵基因AcrB mRNA的表达水平,以及其调控基因MarA和AcrR mRNA的表达量;7、使用Excel 2016和SPSS 25.0软件进行数据整理和统计学分析。以P<0.05为有差异,具有统计学意义。结果:1、肺炎克雷伯菌临床分离菌株主要来自肺科/呼吸科病房,占39.22%,其中呼吸道标本占75.35%。肺炎克雷伯菌对美洛西林的耐药率为66.8%,对替加环素的耐药率为0.8%。碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌占肺炎克雷伯菌临床分离株的13.8%;2、细菌动态生长曲线显示:2048μg/mL青蒿琥酯单独作用时,对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的生长没有明显的抑菌作用,曲线呈明显上升趋势。青蒿琥酯与头孢曲松钠、头孢他啶、环丙沙星、阿米卡星合用时,对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的生长有明显的抑制作用,曲线走向平缓。青蒿琥酯与美罗培南、亚胺培南、左旋氧氟沙星合用时,与单独使用抗菌药物组相比无明显的抑菌效果,曲线呈上升趋势;3、青蒿琥酯与抗菌药物合用时结果显示:2048μg/mL青蒿琥酯可使头孢曲松钠、头孢他啶、环丙沙星、阿米卡星对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的MIC值显著降低,联合用药效果评价以相加作用为主。青蒿琥酯与美罗培南、亚胺培南、左旋氧氟沙星合用时,与单独用药组相比,碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的MIC值没有明显差异变化,联合用药效果评价以无关作用为主;4、qRT-PCR结果显示:12株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中,4株菌株在各组间AcrB基因表达有显著差异,2048μg/mL青蒿琥酯联合256μg/mL头孢曲松钠、2048μg/mL青蒿琥酯联合1024μg/mL头孢他啶,可显著抑制AcrB基因、正向调控因子MarA的表达,而对负向调控因子AcrR的表达无明显影响;8株菌株在各组间AcrB表达无显著性差异。结论:1.肺炎克雷伯菌菌株对美洛西林的耐药率最高,对替加环素耐药率最低;2.青蒿琥酯单独作用时对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌无显著抗菌作用;3.青蒿琥酯可显著增加碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对头孢曲松钠、头孢他啶、环丙沙星、及阿米卡星的敏感性,对美罗培南、亚胺培南、左旋氧氟沙星无明显联合抑菌作用;4.青蒿琥酯与头孢曲松钠、头孢他啶联合抑菌作用,除了与抑制外排泵基因AcrB表达有关外,可能还存在其他作用机制。