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[目的]肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是全球癌症发病率排名第六,癌症致死人数排名第四的恶性肿瘤。目前早期HCC的治疗主要以外科手术切除为首选,但初次诊断时多数到了 HCC的晚期,手术切除率低,术后复发率高,预后较差。而另外一些姑息治疗,如经肝动脉插管化疗栓塞,经肝动脉化疗灌注疗效尚不显著。因此,开发针对HCC可有效改善生存的药物是当务之急,且重点阐明该药物相关通路及目标蛋白可以为肝癌的防治提供新的方案。本课题旨在初步探求黑升麻提取物对肝癌细胞株HepG2及人正常肝细胞株HL7702增殖凋亡的影响及相关作用机制,有望为调控肝癌细胞的凋亡基因表达提供新的靶向药物。[方法]1.细胞毒性检测:采用CCK-8法观察不同浓度黑升麻提取物(0、10、20、30、40、5μg/ml)对HepG2细胞增殖抑制作用,确定IC50;2.DAPI染色:观察对照组(黑升麻药物浓度Oμg/ml)和不同浓度黑升麻提取物干预实验组(10、20、32pg/ml)处理48h后,观察HepG2、HL7702细胞形态变化。3.Annexin-V-FITC/PI双染实验处理后流式细胞仪分析检测对照组和黑升麻提取物处理实验组中HepG2、H17702两细胞株分别的凋亡细胞比率。4.Western blot检测各组中凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9的表达。[结果]0、10、20、30、40、50μg/ml黑升麻药物浓度处理后各组细胞增殖抑制率分别为0%、(12.51±9.31)%、(27.85±1.51)%、(53.20±5.55)%、(67.42±3.54)%、(81.43±0.73)%,各组比较差异有统计学意义(P<0.05),且在10～50μg/ml药物浓度内,随着各组给药浓度增加,细胞增殖抑制率已逐渐增加(P<0.05)。黑升麻提取物在HepG2细胞系中的半数有效增殖抑制率IC50为:32.010μg/ml在DAPI实验中,可直观地观察到10、20、32μg/ml黑升麻药物浓度处理后HL7702、HepG2各组细胞形态学变化:早期凋亡细胞呈现核浓缩,染色加深,或核染色质呈新月形聚集于核膜一边;晚期凋亡细胞表现为核碎裂成大小不等的圆形小体,并被细胞膜所包绕,凋亡小体形成。流式细胞仪检测提示:在人正常肝细胞HL7702中,0、10、20、32μg/ml浓度组凋亡细胞比分别为:(6.62±1.27)%、(12.35±0.59)%、(11.59±0.88)%、(10.34±0.12)%,10、20、32μg/ml浓度黑升麻提取物处理组细胞凋亡百分比对比0μg/ml组上调(P<0.05);在人肝癌细胞系HepG2中,0、10、20、32μg/ml黑升麻提取物处理组凋亡细胞比分别为:(5.17±0.22)%、(20.74±0.38)%、(27.44±1.23)%、(43.83±2.53)%,黑升麻提取物可有效诱导细胞凋亡,且在10～32μg/ml浓度内随着给药浓度的升高凋亡细胞百分比升高(P<0.05)。此外,20μg/ml、32μg/ml浓度黑升麻提取物对比Oμg/ml组可使HepG2细胞Cleaved caspase-3蛋白表达上调,32μg/ml组对比Oμg/ml组可使HepG2细胞Cleaved caspase-8蛋白表达上调(P<0.05)。[结论]1.黑升麻提取物可有效抑制肝癌细胞HepG2的增殖;2.黑升麻提取物能在HepG2细胞系中诱发凋亡,但对应同等浓度药物作用下已能诱导正常肝细胞HL7702细胞系发生凋亡;3,黑升麻提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用至少部分通过外源性死亡受体途径。