槟榔碱是从槟榔中提取的生物碱,为M胆碱受体激动剂。槟榔碱作用于细胞膜,可与相应受体结合,通过蛋白偶联后开放细胞膜离子通道,增加细胞内钙离子浓度,对结肠运动具有一定的促进作用。大量的研究表明,离子通道的调控异常可导致胃肠道动力障碍。因此,研究槟榔碱对结肠平滑肌离子通道表达的影响对结肠运动功能障碍具有重要意义。本实验通过研究离子通道在基因水平上即mRNA表达的影响,进一步分析槟榔碱从分子水平上对平滑肌细胞的影响及作用机制。目的本课题运用分子生物学方法,研究槟榔碱对大鼠结肠平滑肌运动的调节作用,说明药物对离子通道mRNA表达的影响,阐释槟榔碱对大鼠结肠平滑肌细胞运动的分子生物学机制,从分子生物学上验证对结肠动力促进的作用,为进一步阐释槟榔碱对细胞内信号传导及肠道动力的调节研究提供新思路,具有临床应用前景。方法本研究以健康标准体重30只Wistar大鼠为研究对象,正常饲养适应环境1周后,随机分为4组：实验组(各8只),分别给以不同浓度槟榔碱(高、中、低浓度)灌胃；对照组6只,生理盐水灌胃。均自由进饮食,分笼喂养于20-25℃明暗各12小时的动物实验室内,饲养三周后禁食不禁水12小时,称重并用10%水合氯醛(5ml/kg)腹腔注射致死,迅速解剖大鼠的末段结肠并游离平滑肌,生理盐水冲洗后冰上操作,提取RNA,逆转录后用β-actin、钙离子激活性钾通道、电压依赖性钠通道β2亚基、L型钙通道α亚基引物扩增,跑电泳,EB染色后用BN-TA 2020D全自动凝胶成像分析仪观察,与对照组对比分析,用SPSS软件分析各组表达有无差异,根据电泳结果的变化说明药物对离子通道mRNA表达的影响。结果1、钙离子激活性钾通道mRNA实验组与对照组表达无明显差异(P>0.05),高、中、低浓度实验组内表达无明显差异(P>0.05)。2、电压依赖性钠通道mRNA实验组与对照组表达无明显差异(P>0.05),高、中、低浓度实验组内表达无明显差异(P>0.05)。3、L型钙通道mRNA表达,不同浓度灌胃组钙离子通道mRNA表达有明显差异(P<0.01)；实验组与低浓度组无明显差异(P>0.05),中浓度组与高浓度组较对照组、低浓度组表达明显增高,有统计学意义(P<0.01),但高浓度组较中浓度组表达无明显增高(P>0.05)。结论1、用不同浓度的药物给大鼠灌胃,使大鼠体内药物浓度不同,方法简单易行,对大鼠损害、刺激小,无明显机体不良反应。2、mRNA的测定是在分子水平上研究基因表达的常用方法,RT-PCR则以其灵敏度高、专一性好、快速简单的特点,可用来作为mRNA检测的方法。3、高浓度、中浓度槟榔碱灌胃可以上调L型钙通道mRNA表达,但是低浓度槟榔碱对其影响不大；不同浓度槟榔碱灌胃对钙离子激活型钾通道及电压依赖性钠通道无明显上调作用。4、L型钙通道与细胞收缩有直接关系,以往研究证实槟榔碱可以升高细胞内Ca2+浓度,并促进平滑肌细胞收缩,根据RT-PCR结果,因此推测槟榔碱通过上调离子通道表达,是促进胃肠动力作用机制之一。