目的对培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelial，hRPE)细胞中几种MMPs(matrixmetalloproteinases)和TIMP-1(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1)的表达活性进行研究，探讨转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)对MMPs和TIMP-1的调节作用，评价TGF-β1所介导的MMPs活性改变在人RPE细胞迁移中所起的作用，为防治增生性玻璃体视网膜病变(Proliferativevitreoretinopathy,PVR)寻找一种新的基因治疗途径。方法1)3～6代培养的hRPE细胞，采用半定量RT-PCR检测hRPE细胞中MMP-2，-9和TIMP-1的表达，及不同浓度的TGF-β1(0.01，0.1，1，10ng/ml)对hRPE细胞表达MMP-2，-9和TIMP-1的影响。2)经不同浓度的TGF-β1(0.01，0.1，1，10ng/ml)处理，36h后收集条件培养基，或经TGF-β1作用不同时间(24，36，48h)后，收集条件培养基，采用明胶酶谱分析方法定量检测hRPE细胞上清液中MMP-2和MMP-9的活性水平。3)设计渗透房测定，培养的人RPE细胞经10ng/mlTGF-β1作用36h后，在有或无MMP抑制剂-Doxycycline的Boyden小室中，hRPE细胞经双面涂有matrigel胶的硝酸纤维素膜迁移。结果1)抗角蛋白免疫组织化学染色几乎所有的RPE细胞呈阳性着色，培养的人RPE细胞中MMP-2，-9和TIMP-1的mRNA均有表达。TGF-β1能上调MMP-2mRNA的表达，并呈剂量依赖性。低浓度(0.01、0.1ng/ml)TGF-β1处理RPE细胞后，可下调TIMP-1mRNA的表达，随着TGF-β1浓度的增加(1、10ng/ml)，TIMP-1mRNA的表达可轻微上调，但与对照组相比没有显著性差异。2)培养的hRPE细胞上清液中可检测到MMP-2，经TGF-β1处理后，能显著上调培养基中MMP-2的分泌。TGF-β1的浓度从0.01～10ng/ml，MMP-2的分泌活性有明显的剂量依赖性，同时MMP-2的分泌活性随TGF-β1作用时间延长而增强。3)在无Doxycycline的环境下，TGF-β1刺激人RPE细胞后，能明显促进RPE细胞迁移，迁移的RPE细胞数增加约27％。TGF-β1刺激人RPE细胞迁移，在Doxycycline的环境中受到明显抑制，随着Doxycycline浓度的增加，RPE细胞穿过微小多孔膜发生迁移的细胞数相应减少，迁移的RPE细胞数减少约50～70％，并有明显剂量依赖性。结论1)培养的人视网膜色素上皮细胞能表达MMP-2、MMP-9及TIMP-1。2)TGF-β1能调节MMP-2，MMP-9的表达，导致RPE细胞大量释放MMP-2。3)TGF-β1不能诱导TIMP-1的表达成比例增加，导致MMP-TIMP平衡的直接改变。4)MMP分泌活性和表达的改变，有利于RPE细胞的迁移。5)TGF-β1介导的细胞间信号通路，尤其是MMP抑制剂的应用为PVR的基因治疗提供了一种新的治疗模式。 第一部分 转化生长因子β1对培养的人视网膜色素上皮细胞表达MMP和TIMP-1mRNA的影响 目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelial，hRPE)细胞表达MMP-2，-9和TIMP-1的影响。方法采用半定量RT-PCR检测hRPE细胞中MMP-2，-9和TIMP-1的表达，及不同浓度的TGF-β1(0.01，0.1，1，10ng/ml)对hRPE细胞表达MMP-2，-9和TIMP-1的影响。结果培养的人RPE细胞中MMP-2，-9和TIMP-1的mRNA均有表达。TGF-β1能上调MMP-2mRNA的表达，并呈剂量依赖性。低浓度(0.01、0.1ng/ml)TGF-β1处理RPE细胞后，可下调TIMP-1mRNA的表达，随着TGF-β1浓度的增加(1、10ng/ml)，TIMP-1mRNA的表达可轻微上调，但与对照组相比没有显著性差异。结论TGF-β1能上调培养的hRPE细胞中MMP-2mRNA的表达，引起MMP-TIMP平衡的直接改变，可能在玻璃体视网膜的病理机制中，有利于RPE细胞的迁移。 第二部分 转化生长因子β1调节培养的人视网膜色素上皮细胞分泌MMP-2和MMP-9 目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelial，hRPE)细胞分泌MMP-2和MMP-9的调节作用。方法3～6代培养的人视网膜色素上皮细胞，经不同浓度的TGF-β1(0.01，0.1，1，10ng/ml)处理，36h后收集条件培养基，或经TGF-β1作用不同时间(24，36，48h)后，收集条件培养基，采用明胶酶谱分析方法定量检测hRPE细胞上清液中MMP-2和MMP-9的活性水平。结果培养的hRPE细胞上清液中可检测到MMP-2，经TGF-β1处理后，能显著上调培养基中MMP-2的分泌。TGF-β1的浓度从0.01～10ng/ml，MMP-2的分泌活性有明显的剂量依赖性，同时MMP-2的分泌活性随TGF-β1作用时间延长而增强。结论培养的hRPE细胞能分泌MMP-2，TGF-β1能上调hRPE细胞中MMP-2的分泌，MMP-2活性的改变可能在玻璃体视网膜的病理机制中有利于RPE细胞的迁移。 转化生长因子β1刺激人RPE细胞迁移与MMP释放之间的关系 目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)上调培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelial，hRPE)细胞中MMP-2的分泌和表达，对hRPE细胞迁移的作用。并评估MMP抑制剂—Doxycycline对hRPE细胞迁移的影响。方法设计渗透房测定，培养的人RPE细胞经10ng/mlTGF-β1作用36h后，在有或无MMP抑制剂—Doxycycline的Boyden小室中，hRPE细胞经双面涂有matrigel胶的硝酸纤维素膜迁移。结果在无Doxycycline的环境下，TGF-β1刺激人RPE细胞后，能明显促进RPE细胞迁移，迁移的RPE细胞数增加约27％。TGF-β1刺激人RPE细胞迁移，在Doxycycline的环境中受到明显抑制，随着Doxycycline浓度的增加，RPE细胞穿过微小多孔膜发生迁移的细胞数相应减少，迁移的RPE细胞数减少约50～70％，并有明显剂量依赖性。结论TGF-β1介导的MMP上调，在RPE细胞的迁移中起重要的作用。Doxycycline能抑制TGF-β1刺激所致的RPE细胞迁移。