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多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)在膳食、化妆品和医药领域有着重要的意义。γ-亚麻酸(γ-Linolenic acid,GLA)是重要的必需脂肪酸,其属于omega-6系不饱和脂肪酸,是具有18个碳原子,三个双键的直链脂肪酸,称为18:3n-6或6,9,12-十八碳三烯酸,顺-6,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸。GLA在自然界少量存在孢子植物的油中,其主要来源是月见草种籽油,但难以满足市场需求。采用微生物发酵法生产GLA成为GLA的替代来源,产油真菌如Cunninghamella echinulata由于含有较高含量的PUFA,成为PUFAs的生产菌株。 本论文采用不同强度脉冲磁场对产油真菌Cunninghamella echinulata的孢子悬浮液进行诱变,稀释分离培养得到64株诱变株。通过尼罗红染色和荧光显微镜镜检,初筛出3株有望高产油脂的诱变株。对3株诱变株进行发酵复筛,与对照相比,3株诱变株Mut-29,Mut-15和Mut-64 GLA产量分别提高了45.68%,21.97%和20.94%,诱变株Mut-29生物量、油脂含量、油脂产量、GLA含量和GLA产量分别提高了4.55%,21.96%,26.21%,15.38和45.68%,为最佳诱变株。 进一步研究了碳氮源、C/N、培养温度、pH、金属离子、诱导物对突变株Mut-29生物量、油脂和GLA积累的影响,以8%葡萄糖,1%黄豆粉为基质,150rpm,28℃培养7天,诱变株Mut-29的生物量、油脂含量、油脂产量、GLA含量和GLA产量分别提高了7.88%,18.07%27.38%,1.28%和27.93%,GLA产量达到1311mg/L,在同样条件下,以0.5%硝酸钾代替1%黄豆粉,GLA产量达到1282mg/L,比对照高出29.07%;以葡萄糖为碳源、硝酸钾为氮源,C/N为50:1时,GLA产量最高,为1214mg/L,提高了29.70%;使用0.5%混合氮源GLA产量达到1225mg/L。pH对GLA产量影响不大,与对照相比,从pH5.0-6.5,Mut-29GLA产量增加了14.70%-41.94%。低温有利于GLA合成但影响菌体生长,不适合GLA生产。金属离子Mg2+,Zn2+和Fe2+对GLA合成稍有促进,但Zn2+抑制真菌生长和油脂积累。接种前加入诱导剂乙醇和甲醇,尽管GLA含量有提高,由于诱导剂抑制菌体生长和油脂积累而不利于GLA生产。 总之,强磁场诱变是一种有效的提高微生物油脂和GLA产量的诱变方法。得到的诱变株Mut-29是GLA稳产突变株。