黄芩苷调控LncRNA-MALAT1/miR-200c/ZEB1通路抑制乳腺癌细胞迁移侵袭的作用机制研究

来源 :福建中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gg499586617
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目的:探讨黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移侵袭和LncRNA-MALAT1/mi R-200c/ZEB1通路的影响;探讨LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响及调控机制。方法:1.黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移侵袭和LncRNA-MALAT1/mi R-200c/ZEB1通路的影响:(1)通过CCK8实验验证黄芩苷对乳腺癌细胞活力的影响;(2)采用Transwell迁移实验检测黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移的影响;(3)采用Transwell侵袭实验检测黄芩苷干预对乳腺癌细胞侵袭的影响;(4)采用网络药理学方法获取黄芩苷治疗转移性乳腺癌的数据信息;(5)采用QPCR检测黄芩苷干预对乳腺癌细胞TGF-β、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin m RNA表达的影响;(6)采用Western-Blot检测黄芩苷干预对乳腺癌细胞TGF-β、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响;(7)采用QPCR检测黄芩苷干预对乳腺癌细胞LncRNA-MALAT1和mi R-200c表达的影响。2.LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响及调控机制:(1)转染si RNA沉默乳腺癌细胞的LncRNA-MALAT1,采用QPCR验证沉默效果;(2)光学显微镜下观察LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞生长的影响,(3)采用QPCR检测LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞LncRNA-MALAT1表达的影响;(4)采用Transwell迁移实验检测LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移的影响;(5)采用Transwell侵袭实验检测LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞侵袭的影响;(6)采用QPCR检测LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞mi R-200c、ZEB1表达的影响;(7)采用Western-Blot检测LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞ZEB1、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响。结果:1.黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移侵袭和LncRNA-MALAT1/mi R-200c/ZEB1通路的影响:(1)黄芩苷干预乳腺癌细胞24 h,其活力未见显著下降;(2)黄芩苷干预能够显著降低乳腺癌细胞的迁移数量;(3)黄芩苷干预能够显著降低乳腺癌细胞的侵袭数量;(4)黄芩苷与转移性乳腺癌的共同靶点EGFR、TGF-β等之间复杂交互作用调控信号通路的转导,与乳腺癌转移密切相关;(5)黄芩苷干预显著下调TGF-β、ZEB1和N-cadherin,而上调E-cadherin的m RNA表达;(6)黄芩苷干预显著下调乳腺癌细胞TGF-β、ZEB1和N-cadherin的蛋白表达,并同时上调E-cadherin的蛋白表达;(7)黄芩苷干预显著下调乳腺癌细胞LncRNA-MALAT1的表达和上调mi R-200c的表达。2.LncRNA-MALAT1沉默与黄芩苷干预对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响及调控机制:(1)si RNA显著抑制了乳腺癌细胞LncRNA-MALAT1的表达;(2)LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均能抑制乳腺癌细胞生长;(3)LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均能显著下调乳腺癌细胞LncRNA-MALAT1的RNA表达,两者联合干预可进一步下调LncRNA-MALAT1的表达;(4)LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均能显显著下调乳腺癌细胞的迁移数量,两者联合干预可进一步下调细胞的迁移数量;(5)LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均能显著下调乳腺癌细胞的侵袭数量,两者联合干预可进一步下调细胞的侵袭数量;(6)LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均能显著上调mi R-200c的表达和下调ZEB1的m RNA表达,两者联合干预可进一步上调mi R-200c的表达和下调ZEB1的m RNA表达;(7)LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均能显著下调ZEB1和N-cadherin的蛋白水平,并上调E-cadherin的蛋白水平,两者联合干预可进一步下调ZEB1和N-cadherin的蛋白表达,并上调E-cadherin的蛋白表达。结论:LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均可抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,两者联合干预可进一步抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。LncRNA-MALAT1沉默或黄芩苷干预均可下调乳腺癌细胞LncRNA-MALAT1的表达和上调mi R-200c的表达,并可同时下调ZEB1和N-cadherin,而上调E-cadherin的表达,两者联合干预效果更加显著。由此可见,LncRNA-MALAT1可能是黄芩苷抑制乳腺癌细胞迁移与侵袭的潜在靶点之一。调控LncRNA-MALAT1/mi R-200c/ZEB1信号通路的活化可能是黄芩苷发挥抗乳腺癌转移的机制之一。
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