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在真核生物中基因组DNA以染色体的形式被包装，而染色体的基本单位是核小体，由147 bp DNA环绕核心组蛋白八聚体而成，有五种类型:H1、H2A、H2B、H3、H4。最近的研究中发现在染色体中存在很多组蛋白变体的形式，它们与经典组蛋白之间在序列上仅存在几个氨基酸的差异。并且阐明了许多在染色体装配和形成中的分子机制，在概念上分为DNA复制依赖性通路和DNA复制非依赖性通路。通常大多数核小体由经典组蛋白组成，它们与DNA的复制过程紧密相关。已有研究表明许多组蛋白变体能定位到染色体的特定区域，在转录调控和表观修饰记忆上起到了重要的作用。在哺乳动物中，组蛋白变体H3.3作为基因活跃表达的标记在染色体环境中的调控和表达过程中调节不同区域DNA片段的活性，如DNA修复，转录调控，或者DNA复制过程。近年来随着蛋白质组学技术的逐渐发展，人们已经发现了许多卵子中存在的一些母源因子，在重编程过程中发挥重要作用。组蛋白变体H3.3就是母源因子之一，该蛋白在核移植以后，可以替换掉供体细胞中的H3，并且影响到一些其它多能性基因的表达，但是有关调控机制的研究还不是很清楚。牛作为繁殖周期长的家畜，有关核移植机理方面的研究报道较少。在牛核移植胚胎中对是否存在组蛋白变体H3.3的动态替换的过程，它的作用过程和发生机制如何，目前还未见报道。为了阐明这个问题，本论文通过已构建Flag和HA标记的H3f3b基因真核表达载体，分别在体细胞和胚胎中进行显色表达，构建核移植中组蛋白变体H3.3交换研究平台，进行了相关研究，研究结果如下: 1通过构建的Flag和HA标记的H3f3b基因真核表达载体在293T细胞及牛胎儿成纤维细胞上验证，表明载体的有效性及融合蛋白可以特异性的定位在细胞核上。 2载体转染细胞后，经免疫荧光鉴定，成功筛选出能稳定表达Flag标记的组蛋白变体H3.3融合蛋白的成纤维细胞株。 3体外转录出带有HA标签的H3.3 mRNA，分别转染体细胞和卵母细胞显微注射，进行了表达鉴定，表明带有HA标签的H3.3 mRNA在体细胞和卵母细胞中均能准确表达和定位。 4将正确表达的HA-H3.3 mRNA显微注射到GⅤ期卵母细胞进行体外成熟培养，发现随着卵母细胞发育，HA-H3.3在核中的表达信号明显减弱且主要集中在MⅡ期卵母细胞的纺锤体及排出的第一极体中。HA-H3.3 mRNA显微注射到MⅡ期卵母细胞表达稳定后，观察到HA-H3.3信号主要集中于卵母细胞核中，但是在胞质中也有弥散性分布。将HA-H3.3 mRNA显微注射于1-cell克隆胚胎中，发现HA-H3.3信号集中于1-cell克隆胚胎核中，推测在牛胚胎中存在H3.3替换的发生。 5选择未处理的牛胎儿成纤维细胞作为供核细胞注射到表达HA-H3.3 mRNA的去核卵母细胞中，观察到激活后核移植胚胎中卵母细胞中的HA-H3.3信号逐渐募集到供体核中，并在原核期信号表达最强。选择稳定表达Flag标记的组蛋白变体H3.3融合蛋白的牛胎儿成纤维细胞作为供核细胞，注射进正常成熟并去核的MⅡ卵母细胞，观察到激活后克隆胚胎中Flag标记的组蛋白变体H3.3快速丢失，在2-cell期克隆胚胎中完全观察不到Flag标记的组蛋白变体H3.3的信号。从以上两方面证实牛卵母细胞在核移植过程中存在组蛋白变体H3.3的动态替换过程。