在新药研究过程中若能获得药物代谢酶选择性催化作用信息和代谢作用机理以及药物对酶的诱导或抑制作用，则可预测药物在体内发生相互作用的可能性，从而大大减少上市后因可能严重相互作用而被淘汰的巨大风险，对临床安全、合理、有效用药，避免不良反应具有重要的指导意义，同时也为新药的分子设计提供思路和依据。 SYUIQ-5是由中山大学药学院最新合成的吲哚喹啉类衍生物，具有诱导染色体端粒的-TTAGGG-重复序列形成稳定的G-四链体的作用，SYUIQ-5能抑制人白血病K562细胞和人结肠癌SW620细胞中的端粒酶使端粒变短，从而使癌细胞停止生长直至衰老死亡而发挥抗肿瘤作用，动物体内实验也观察到明显的抗肿瘤作用。虽然我们得知SYUIQ-5具有抗肿瘤作用，但缺乏其药动学方面的资料，所以本文的工作旨在对SYUIQ-5临床前药代动力学过程，吸收特点，参与SYUIQ-5代谢的P450亚酶以及SYUIQ-5对P450的影响进行研究，以支持人的药代动力学研究并为临床用药提供参考。 主要工作包括以下六个部分： 第一部分.测定大鼠血浆中SYUIQ-5的HPLC方法的建立 目的：建立测定大鼠血浆中SYUIQ-5的HPLC方法。 方法：血浆样品以氯化氨缓冲液(pH=10.0)碱化后用乙醚提取其中的SYUIQ-5和内标SUCL。色谱条件：HypersilBDSC18柱(5μm，4.6mm×150mm)；流动相：30mmol·L-1磷酸氢二钾缓冲液(pH=8.0)-甲醇-三乙胺(30∶70∶0.05，v/v/v)；流量为1mL·min-1；柱温：室温；紫外检测波长：278nm。 结果：线性范围为30～1500μg·L-1，线性关系良好，相关系数为0.9990，最低检测限为20μg·L-1，日内RSD≤5.2％，日间RSD≤3.8％；提取回收率72.1％～80.5％(n=5)，相对回收率在96.8％～105.1％范围内。 结论：本方法灵敏度高，重现性好，精密度和准确性高，符合生物样品检测方法的要求，为SYUIQ-5药代动力学研究提供可靠的检测方法。 第二部分.SYUIQ-5在大鼠体内的药代动力学研究 目的：考察单次腹腔注射后SYUIQ-5在大鼠体内的药动学特征。 方法：雄性SD大鼠单次腹腔注射15，30和60mg·kg-1三种剂量的SYUIQ-5后，在不同的时间取血，离心(10000r·p-1，10min)，取血浆，用上述HPLC方法检测其浓度，使用3p87软件分析结果。 结果：15，30和60mg·kg-1三剂量组的Cmax分别为142.75、190.88、336.41ng·mL-1(比例为1：1.4：2.4)，AUC分别为12739.44、17877.75、42454.98ng·min-1·mL-1(比例为1：1.4：3.3)，Cmax和AUC与剂量成比例；t1/2分别为60.62、55.75、75.94min，各剂量组给药后CL/F分别为1.18、1.68、1.41L·min-1·kg-1，V/F分别为102.98、134.98、154.85L·kg-1，各剂量组间无显著性差异(p＞0.05)。 结论：单次腹腔注射SYUIQ-5在大鼠体内的药动学过程呈线性动力学特征，符合一室模型。 第三部分.SYUIQ-5在Caco-2细胞模型中的转运特点 目的：考察SYUIQ-5在Caco-2细胞模型中的转运特点。 方法：用Caco-2细胞单层模型研究SYUIQ-5的双向转运，并考察时间，SYUIQ-5浓度，温度，能量抑制剂和P-gp抑制剂对SYUIQ-5吸收的影响。用高效液相色谱法检测SYUIQ-5在不同浓度，不同时间，不同温度，以及有无能量抑制剂和P-gp抑制剂的情况下的吸收浓度，以计算其表观渗透系数(Paap)。 结果：在Caco-2细胞模型中，SYUIQ-5从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运呈时间和浓度依赖性，能量抑制剂及低温能减小Paap，而P-gp抑制剂能促进SYUIQ-5的转运。另一方面，SYUIQ-5从单层细胞层基底端(BL)到顶端(AP)的转运没有浓度依赖性，不受温度，能量抑制剂和P-gp抑制剂的影响。 结论：在Caco-2细胞模型中，SYUIQ-5从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运主要是由位于Caco-2细胞单层顶端(AP)的载体介导的主动转运，且受到P-gp的影响，这可能是导致其吸收差的原因之一。 第四部分.SYUIQ-5在鼠肝微粒体中的代谢及其代谢物的初步确证(1)SYUIQ-5在鼠肝微粒体中的代谢 目的：建立HPLC测定大鼠肝微粒体中SYUIQ-5的方法，确定参与SYUIQ-5代谢的P450亚酶。 方法：对SYUIQ-5在不同诱导剂β-萘黄酮(80mg·kg-1·d-1,3d)，苯巴比妥(80mg·kg-1·d-1，3d)，地塞米松(100mg·kg-1·d-1,4d)，20％乙醇(5mL·kg-1·d-1,4d)，SYUIQ-5(5mg·kg-1·d-1,5d)和空白对照(生理盐水5mL·kg-1·d-1，5d或植物油2mL·kg-1·d-1，3d)处理的鼠肝微粒体中以及在加入各个CYP亚酶抑制剂的空白大鼠肝微粒体中的代谢进行了研究。 结果：发现地塞米松(Dex)和β-萘黄酮(β-NF)能增加SYUIQ-5的代谢，酮康唑能抑制SYUIQ-5的代谢。 结论：在SYUIQ-5的代谢中，CYP3A1起主要作用，CYP1A1起次要作用。 (2)SYUIQ-5在鼠肝微粒体中代谢物的初步确证 目的：初步推测SYUIQ-5在大鼠肝微粒体中的代谢物。 方法：SYUIQ-5(终浓度3μg·mL-1)在肝微粒体孵育体系(总体积500μL，大鼠肝微粒体终浓度3mg·mL-1，磷酸盐缓冲液pH=7.4)37℃水浴中预温孵5min后，向其中加入NADPH溶液(终浓度1mM)，孵育20min后加入冰冷的乙醚2mL，迅速混合，以终止反应，涡旋振荡2分钟，离心(4000r.min-1)10分钟，吸取有机相，负压挥干，以HPLC和LC/MS/MS进行分析。 结果：样品HPLC色谱图上发现有代谢物的色谱峰，采用LC/MS/MS综合分析代谢产物的准分子离子，二级碎片离子和色谱保留时间，确定SYUIQ-5在大鼠肝微粒体中有2个代谢物产生。 结论：确定SYUIQ-5在大鼠肝微粒体中的代谢物为吲哚喹啉母核侧链末端叔胺发生了N-去甲基化和N-氧化的产物。 第五部分.SYUIQ-5对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶基因，蛋白表达和酶活性的影响 (1)SYUIQ-5对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶基因，蛋白表达的影响目的：考察SYUIQ-5对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶基因和蛋白表达的影响。方法：SYUIQ-5分3个剂量0.1mg·kg-1，5mg·kg-1，10mg·kg-1，雄性SD大鼠经腹腔注射连续处理5天后，取肝组织，制备肝微粒体和提取总RNA，分别应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹杂交(Westernblot)法，检测CYP3A1，2B1/2，1A1，2E1mRNA和蛋白的表达。结果：与空白对照组相比，SYUIQ-5可显著诱导CYP1A1mRNA和蛋白的表达，对CYP3A1，2B1/2和2E1mRNA和蛋白表达无影响。结论：SYUIQ-5可显著诱导CYP1A1mRNA和蛋白的表达。 (2)SYUIQ-5对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶活性的影响 目的：考察SYUIQ-5对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶活性的影响。 方法：SYUIQ-5分3个剂量0.1mg·kg-1，5mg·kg-1，10mg·kg-1，雄性SD大鼠经腹腔注射连续处理1，5和10天后，取肝组织，制备肝微粒体，应用HPLC法检测CYP3A1，2B1/2，1A1，1A2和2E1的酶活性。 结果：与空白对照组相比，SYUIQ-5可显著诱导CYP1A1和CYP1A2的酶活性，对CYP3A1，2B1/2和2E1的酶活性无影响。 结论：SYUIQ-5可显著诱导CYP1A1和CYP1A2的酶活性。 第六部分.SYUIQ-5和SYUIQ-5衍生物F318大鼠口服吸收比较 目的：大鼠一次性灌胃相同剂量(60mg.kg-1)的SYUIQ-5和F318后，比较二者的吸收情况。 方法：雄性SD大鼠一次性灌胃60mg·kg-1SYUIQ-5和F318后，在不同的时间取血，离心(10000r·min-1，10min)，取血浆，加内标，以氯化氨缓冲液(pH=10.0)碱化后用乙醚提取其中的SYUIQ-5和内标SUCL，挥干，用HPLC分析。 结果：SYUIQ-5和F318的Cmax分别为56.21、301.15μg·L-1(1：5.4)，AUC分别为325.02、900.08μg·L-1·h-1(1：2..77)。 结论：大鼠一次性灌胃相同剂量(60mg.kg-1)SYUIQ-5和F318，F318比SYUIQ-5容易吸收。