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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)感染所致的一种急性传染病。该病以繁殖障碍、呼吸道疾病、哺乳仔猪的高死亡率、免疫抑制和持续性感染等为主要特征,对养猪业的危害极大。2006年5月我国自南方地区开始发生的高致病性(highly pathogenic, HP)“蓝耳病”,使我国的养殖业蒙受空前损失,而每年的深秋至次年的早春,更是蓝耳病病毒肆虐的季节。PRRSV感染猪的免疫系统是一把“双刃剑”,一方面,PRRSV嗜好在肺巨噬细胞中大量复制,因此它与宿主疾病的进程及免疫系统的变化密切联系在一起,复制的直接结果是导致宿主发生免疫调节紊乱,引起继发感染或加速其它疾病进程；另一方面,该病毒又刺激宿主在感染后产生保护性免疫,使动物免受再次感染。PRRSV及其PRRS在兽医领域是令人棘手的一种传染病,目前为止,尚无有效的疫苗能够控制该病的发生。本课题研究了HP-PRRSV感染对免疫系统的损伤状况；利用针对PRRSV GP5抗原的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)对机体进行免疫调控,研究PRRSV感染与体内抗独特型抗体的关系；探索NMHCⅡ-在PRRSV感染中的免疫功能。为阐明PRRSV感染的免疫调控机制做出贡献。1、HP-PRRSV感染对机体免疫系统的损伤为阐明HP-PRRSV对机体免疫系统的损伤状况,本研究分别实验性感染PRRSV阴性断奶仔猪及CH-1R PRRSV弱毒苗免疫的断奶仔猪,观察临床症状及免疫器官的病理组织学变化、检测不同感染时间血清细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10及血清抗PRRSV膜蛋白和N蛋白的水平,了解高HP-PRRSV感染对不同状态猪群免疫器官的损伤状况。结果显示,PRRSV阴性猪群感染HP-PRRSV后,胸腺逐渐萎缩,血清IL-10含量在感染后10天明显高于CH-1R PRRSV弱毒苗免疫猪感染高致病性PRRSV的猪群；然而,CH-1R PRRSV弱毒苗免疫猪感染HP-PRRSV后临床症状、免疫系统病理学变化较PRRSV阴性猪群感染HP-PRRSV后缓和,且血清IL-4含量在感染后5天和7天明显高于PRRSV阴性猪群感染HP-PRRSV。该实验结果表明：HP-PRRSV感染断奶仔猪导致免疫系统严重损伤,胸腺萎缩,从而导致免疫抑制、免疫网络紊乱；HP-PRRSV感染早期诱导机体产生的IL-10增强了病毒在体内的适应性并推迟了有效抗体的产生时间；而HP-PRRSV感染后血清IL-4的含量与病毒血症的清除及机体的健康状态成正相关。2、抗独特型抗体调控机体对高致病PRRSV感染的免疫反应感染了PRRSV的猪血清中存在两种不同的抗GP5的自身抗独特型抗体(auto-Ab2),可正反馈或负反馈机体的免疫系统对PRRSV感染的免疫反应。为探讨不同剂量的Mab2-5G2调控机体对抗HP-PRRSV感染的效果,本研究分别利用不同剂量的Mab2-5G2及鼠源IgG分别按照0.5,1,3或5mg/头的剂量PRRSV阴性断奶仔猪进行免疫调控,HP-PRRSV实验性感染实验猪群,观察临床症状并检测不同感染时间血清细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10含量的变化及血清中抗PRRSV N蛋白和膜蛋白的抗体水平,了解HP-PRRSV感染与机体免疫网络的关系。结果显示,Mab2-5G2使用剂量为0.5-1mg/头时,可将断奶仔猪感染HP-PRRSV后成活率提高50%；Mab2-5G2使用剂量为1mg/头的猪群, HP-PRRSV感染后14天抗膜蛋白抗体水平明显高于其他组抗体水平。Mab2-5G2使用剂量为0.5-1mg/头时,可使机体IL-4的水平在HP-PRRSV感染后3-7天内迅速升高,之后恢复到感染前的水平；其他各组猪群感染HP-PRRSV后血清IL-4水平变化呈轻微波动状态,与阳性及阴性对照组无明显差异；HP-PRRSV感染可诱导猪体内产生IFN-γ及IL-10,与Mab2-5G2或鼠源IgG免疫调控无关。3、抗独特型抗体调控PRRSV弱毒苗对高致病性PRRSV感染的保护效果本研究目的是利用Mab2-5G2对机体进行免疫调节,调控机体对PRRSV疫苗的细胞和体液免疫反应能力。实验猪群分别利用Mab2-5G2及相同亚型的鼠源IgG进行免疫调控,然后连续两次免疫CH-1R弱毒苗,最后使用HP-PRRSV实验性感染,观察临床症状及免疫器官的病理组织学变化、检测不同感染时间血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12及血清抗PRRSV N蛋白和膜蛋白的抗体水平,了解Mab2-5G2对CH-1R弱毒苗免疫调控的作用。实验结果显示,Mab2-5G2作为免疫调节剂,按1mg/头的剂量使用时,降低了PRRSV弱毒苗对HP-PRRSV感染的保护性,该猪群与鼠源IgG对照猪群相比,HP-PRRSV感染后体温较高且持续时间长,感染早期血清病毒含量较高；同时Mab2-5G2诱导机体在免疫期产生较高水平的IL-2和IL-4。较高含量的IL-2可激活T-regs,导致机体自身免疫失衡；PRRSV感染时机体IL-4含量高的猪体有利于PRRSV病毒的复制,因此降低了PRRSV弱毒苗的保护效果。4、非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A对高致病性PRRSV感染免疫功能初探为探讨非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A (NMHCⅡ-A)对HP-PRRSV感染的免疫功能,本研究利用Mab2-5G2-TRITC通过流式细胞术验证了NMHCⅡ-A存在于所有的外周血淋巴细胞。利用条件性表达NMHCⅡ-A蛋白(PRA)免疫PRRSV阴性断奶仔猪,HP-PRRSV实验性感染免疫猪群发现：HP-PRRSV感染前期血清病毒含量明显高于HP-PRRSV直接感染猪群；病毒感染后7天、14天,CD4+/CD8+的值明显低于病毒直接感染猪群及正常对照猪群；病毒感染后,血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12细胞因子含量低于病毒直接感染猪群及正常对照猪群,抗PRRSV N蛋白及膜蛋白的抗体水平均低于HP-PRRSV直接感染猪群同期抗体水平。以上结果显示：NMHCⅡ-A除与PRRSV感染易感细胞有关外,还与机体免疫反应有关。