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猪圆环病毒2型(PCV2)在世界范围内广泛流行,给养殖业造成严重的损失。PCV2是一种小的,无外膜的,圆形的单股DNA病毒。PCV2是猪圆环病毒病的致病因子,可引起断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、母猪繁殖障碍、先天性震颤(CT)、增生性坏死性肺炎(PNP)、猪呼吸道综合征(PRDC)等多种疾病。患畜感染猪圆环病毒后,会引起机体单核巨噬细胞系统的变化。通过研究猪圆环病毒对单核巨噬细胞系统的影响,探讨其致病机理,为更好帮助解决、治疗猪圆环病毒病提供了基础与新思路。本文通过聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学(IHC-P)和免疫荧光(IF)的方法,对送检猪样本中的腹股沟淋巴结、颌下淋巴结进行检测PCV2。再对阳性样本的病死猪的临床症状、剖检变化进行归纳总结,总结出感染PCV2猪的典型的临床症状、一般的临床症状以及主要的病理剖检变化。PCV2感染BALB/C小鼠,在7d、14d、28d剖杀小鼠,取胸腺,脾脏,检测单核巨噬细胞在免疫器官的增殖与分化。在3d、12d注射BrdU,并应用免疫磁珠法与流式细胞术对外周血单核细胞和脾脏的单核巨噬细胞进行提取分析。实验结果如下:1、临床症状:对PCV2阳性病猪的临床症状进行分析,病猪出现消瘦、被毛粗乱是PCV2疾病的典型临床症状。皮肤苍白、进行性呼吸困难也是大部分病例的临床特征。部分猪有皮炎、皮肤黄染、嗜睡和下痢等症状,皮炎主要表现为四肢末梢,有时后肢有出血斑块或斑点。2、剖检变化:对PCV2阳性病猪进行剖检,所有病猪都出现淋巴结病变,淋巴结均有不同程度的出血。’肾脏出现肿大、表面有灰白色的斑点,部分肾脏有出血病变。脾脏主要表现为肿大、边缘出血等,也有少部分不肿大,但质地变脆。肺出现弥漫性肺炎。胸腹水也是可以观察到的病理变化。部分病例可见肝脏花斑状条纹,结肠或回肠有时黏膜充血、瘀斑。3、PCR检测PCV2:在475bp处检测到阳新信号,与阳性对照结果一致,说明病猪感染圆环病毒。4、免疫组织化学(IHC-P)检测PCV2:在猪颌下淋巴结和腹股沟淋巴结进行免疫组化检测,均检测到阳性信号。5、免疫荧光(IF)检测PCV2:在猪脾脏内检测到圆环病毒阳性细胞。6、PCV2对Balb/c小鼠单核巨噬细胞系统的影响:为了进一步确定巨噬细胞增殖的来源,选取腹腔注射BrdU这类碱基替代物。由于单核细胞从骨髓分化而来,到达免疫器官需要3-4天,通过BrdU和巨噬细胞的免疫荧光双标法,确定增殖的一部分巨噬细胞是原位增殖。通过免疫磁珠法筛选出外周血与脾脏中CD11b+,再通过流式细胞术检测攻毒组Ly-6G, Ly-6Chi、Ly-6Clo的细胞含量增加,均高于未攻毒组。而攻毒组采用尾静脉注射氯磷酸脂质体后,CDllb+,Ly-6G, Ly-6Chi、Ly-6Clo的细胞含量减少,确定增殖的一部分细胞属于外周血来源的。结论:通过聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学(IHC-P)和免疫荧光(IF)的方法均在送检猪样本中的腹股沟淋巴结,颌下淋巴结检测到PCV2病毒。三种方法阳性表达一致并与临床初步诊断结果相符,证明猪体内确实含有圆环病毒2型。通过免疫组织化学法对攻毒小鼠的检测,发现PCV2会引起巨噬细胞的增殖,增殖的途径一部分是原位增殖,一部分是外周血来源的增殖。