指状青霉(Penicillium digitatum)对抑霉唑抗性及分子机理研究

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从杭州水果批发市场、水果销售点收集若干指状青霉菌(Penicillium digitatum),对其中部分菌株进行抑霉唑的敏感性测定,结果发现,各菌株对抑霉唑敏感性存在差异,并存在抗性菌株.不同甾醇生物合成抑制剂的交互抗性研究发现,抑霉唑抗性菌株对咪鲜胺、氟硅唑、三唑酮均表现正交互抗药性.不同抗性菌株适合度研究结果表明,抗性菌株的致病力与敏感菌相比下降明显,而抗性菌株的产孢能力和菌丝生长速率与敏感菌相比,略有下降.通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增获得1个抑霉唑敏感和2个抑霉唑抗性的指状青霉(P.digitatum)菌株的14-α-脱甲基酶(CYP51)基因全序列,并克隆到pGEM-Teasy Vector.序列分析表明,敏感菌株Pd23CYP51基因全长2082bp,包含一个读码框的14-α-脱甲基酶基因的完整编码区序列,3个典型真菌内含子序列将该基因分成4个外显子序列共同编码一个516aa的蛋白质.抗性菌株Pd01和Pd07的CYP51基因全长均为2586bp.序列比较表明Pd01、Pd07和Pd23的CYP51基因结构基本一致,所不同是Pd01和Pd07的CYP51启动子上游均增加了4个序列一致、长度为126bp的串联重复序列;同时敏感菌株第208、308和437位的氨基酸分别为:甘氨酸、酪氨酸和组氨酸,而抗性菌株则为丙氨酸、组氨酸和酪氨酸.
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