研究背景和目的:肾癌是泌尿系统中常见的恶性肿瘤之一,其发病率在全世界范围内呈逐年上升趋势。靶向治疗是失去手术机会肾癌患者的最常用治疗手段,然而靶向治疗抵抗常导致患者临床获益不佳。舒尼替尼是进展期肾癌患者的一线治疗方案,但是,约10%的进展性肾癌患者在初次治疗时就对舒尼替尼治疗不敏感,而其余的患者往往在接受舒尼替尼治疗6-15个月后出现耐药,这些现状使得舒尼替尼靶向治疗不能有效延长肾癌患者的生存期。因此,探索肾癌舒尼替尼耐药的生物学机制以及寻找增强肾癌舒尼替尼治疗敏感性的分子靶点十分迫切。非编码RNA在肿瘤的发生、发展中扮演着重要的角色,而最新的研究表明其在肿瘤药物耐药中也发挥着重要的作用。TUG1是长链非编码RNA中的成员,表达在患者肾癌标本与肾癌细胞株中都显著上调,抑制TUG1的表达可以有效抑制肾癌细胞的增值和迁移。研究表明TUG1在乳腺癌、肺癌的化疗耐药中发挥重要的作用,然而,TUG1在肾癌舒尼替尼耐药中的作用及机制研究却很少。细胞自噬在肾癌舒尼替尼耐药扮演重要角色,肿瘤细胞在受到化疗药物刺激时,自噬信号通路被激活,自噬水平提高,从而分解这些药物分子,降低其自身对药物敏感性,促进细胞存活,自噬相关基因HMGB1在肾癌组织中呈现高表达,且与多种肿瘤的化疗敏感性密切相关,且相关文献报道,HMGB1受TUG1调控,但HMGB1在肾癌靶向治疗耐药中的作用及机制研究却很少。本研究旨在探讨TUG1通过HMGB1调控细胞自噬影响肾癌舒尼替尼治疗敏感性的作用及其机制。方法:1.荧光定量PCR法分析TUG1在肾癌组织及细胞中的表达。2.定制sh-NC/sh-TUG1慢病毒,构建肾癌sh-NC/ACHN、sh-TUG1/ACHN和sh-NC/786-0、sh-TUG1/786-0稳转细胞株。通过细胞毒性实验确定舒尼替尼在肾癌细胞株ACHN、786-0中的半抑制浓度IC50。利用CCK8实验观察sh-NC/ACHN、sh-TUG1/ACHN细胞在舒尼替尼干预条件下生长能力的变化,然后采用流式细胞术检测细胞凋亡比例变化,Western blot法检测凋亡蛋白表达变化,明确TUG1下调对肾癌舒尼替尼治疗敏感性的影响。3.改变TUG1表达后,分别采用Western blot法、细胞免疫荧光、自噬电镜法检测下调TUG1对肾癌细胞自噬水平的影响。在下调TUG1肾癌细胞中给予自噬激活剂雷帕霉素,通过CCK8、流式细胞术、Western blot检测,观察对舒尼替尼敏感性和细胞凋亡的影响。4.采用荧光定量PCR法、Western blot检测下调TUG1对HMGB1表达的影响。在下调TUG1肾癌细胞中,增加HMGB1的表达,通过CCK8、流式细胞术、Western blot检测,观察对舒尼替尼敏感性和细胞凋亡的影响。结果:1.荧光定量PCR结果证实,lncRNA-TUG1在肾癌组织和肾癌细胞株中的表达水平显著升高（p<0.01）。2.下调ACHN和786-0细胞中TUG1的表达后,给与舒尼替尼干预48小时,CCK8实验表明其生长能力减弱（p<0.01）;细胞凋亡比例明显升高（p<0.05）;Western blot检测其凋亡蛋白Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高（p<0.05）,抑凋蛋白Bcl-2蛋白表达水平下降（p<0.05）。结果表明,下调TUG1可增强肾癌细胞对舒尼替尼的敏感性。3.Western blot法、细胞免疫荧光、自噬电镜法证实,下调ACHN和786-0细胞中TUG1的表达,降低了肾癌的细胞自噬水平。雷帕霉素增强自噬可以逆转TUG1下调所增强的肾癌舒尼替尼治疗的敏感性。4.下调ACHN和786-0细胞中TUG1的表达后,荧光定量PCR、Western blot结果显示HMGB1的表达降低。过表达HMGB1可增强细胞自噬水平,同时逆转TUG1下调所增强的肾癌舒尼替尼治疗的敏感性。结论:lncRNA-TUG1通过下调HMGB1介导的细胞自噬增强肾癌细胞对舒尼替尼治疗的敏感性。我们的研究成果将为逆转肾癌舒尼替尼耐药提供理论依据,探索肾癌靶向治疗耐药后的解决方案。