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本实验主要内容为通过提取草酸青霉(Penicillium oxalicum)S1J 1DNA与RNA,参考斜卧青霉(Penicillium decumberns)β-葡糖苷酶基因设计引物,利用PCR和RT-PCR技术分别克隆出草酸青霉β-葡糖苷酶bgl1和bgl2基因全长及cDNA。通过测序及生物信息学分析得知bgl1基因全长2963 bp,包含5个内含子、6个外显子,编码861个氨基酸。bgl2全长1778 bp,包含3个内含子、4个外显子,编码463个氨基酸。将BGL1的CDS序列与pPIC9K连接后,构建重组表达载体pPIC9K-bgl1。将线性化的表达质粒电击转化至毕赤酵母GS115中。通过含有0.25 mg/mL G418抗性平板、含有0.25%七叶苷和0.1%柠檬酸高铁铵平板筛选后,通过菌液PCR及以阳性转化子基因为模板PCR通过菌液PCR及以阳性转化子基因为模板PCR验证得到阳性重组工程菌GS115-pPIC9K-bgl1。重组菌经过1.5%的甲醇诱导表达,粗酶液通过pNPG法检测具有β-葡糖苷酶活性,酶活为0.297 U/mL。SDS-PAGE电泳结果显示,表达产物约为97KDa。通过响应面法优化得到最佳诱导发酵培养基配方为酵母粉12.01 g、硫酸铵16.89 g、山梨醇23.41 g、甲醇1.5%,该培养基可提高表达量19.47%。发酵粗酶液通过冻干浓缩、硫酸铵分级沉淀、透析除盐、SephadexG100层析分离后,得到纯的BGL1酶液。BGL1酶学性质分析后,其最佳反应时间为30min,最适反应温度为50℃、最适pH为6.0,存储最佳温度为低温、最佳PH为6.0。Ba2+离子对BGL1酶活有极大的促进作用、Cu2+离子对BGL1酶活有极大的抑制作用。