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目的:探讨多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导人AFP增强子/启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷自杀基因系统体内外靶向杀伤肝癌细胞的效应。
方法:构建人AFP增强子/启动子驱动的pAFP-cDNA3.1-rFK自杀基因真核表达质粒,制备多聚赖氨酸-硅纳米颗粒,以多聚赖氨酸-硅纳米颗粒和脂质体介导转染肝癌细胞:采用RT-PCR和Western blot检测TK mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞的存活率,观察丙氧鸟苷对肝癌细胞体外增殖、生长曲线和细胞凋亡的作用,丙氧鸟苷体内抑制肿瘤生长效应。采用t检验分析相关数据。
结果:以HepG2细胞基因组DNA为模板,克隆人AFP增强子、启动子基因核心区,连接到真核表达载体pcDNA3.1的启动子区,并将TK基因连接到pcDNA3.1的多克隆位点,成功构建人.AFP增强子/启动子驱动的pAFP-cDNA3.1-TK自杀基因真核表达质粒;并以微乳液法成功制备多聚赖氨酸-硅纳米颗粒;通过多聚赖氨酸-硅纳米颗粒和脂质体介导转染肝癌细胞;AFP阳性HepG2细胞中检测到TK mRNA和蛋白表达,且多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导组转染效率明显高于脂质体组;添加丙氧鸟苷体外剂量和时间依赖性抑制转染后HepG2的生长并诱导其凋亡,多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导组治疗效应也明显高于脂质体组;AFP阴性SMMC7721细胞中没有TK mRNA和蛋白表达,细胞增殖、生长曲线和凋亡均不受影响,两者比较差异有统计学意义。丙氧鸟苷体内可以特异性地抑制转染后HepG2肿瘤生长,肿瘤抑制率多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导组也明显高于脂质体组,SMMC7721肿瘤生长不受影响,两者比较差异有统计学意义。
结论:多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导的人AFP增强子/启动子驱动的HSV-TK/GCV自杀基因系统可以靶向杀伤AFP阳性肝癌细胞,抑制肿瘤生长,治疗效应明显优于脂质体。