红珊瑚的化学成分及促进骨折愈合作用研究

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本论文对红珊瑚的鉴别特征、化学成分及药理作用等方面进行了研究,为红珊瑚的今后的研究和应用提供依据。首先对腔肠动物门红珊瑚科物种的分类、资源分布、红珊瑚骨骼的形成及形态特征方面进行总结,并在传统医药领域的药用情况及价值、化学成分、药理作用等方面进行了综述。药材鉴别要点,红珊瑚药材性状呈断碎的树枝状或短棒状,大小不一,表面呈红色,有纵向细纹。显微结构方面,光学显微镜下观察红珊瑚粉末,多见具有棱角状颗粒,半透明,边缘暗黑色,也可见到针状,针簇状或片状结晶。有少量的珊瑚虫触手残段。扫描电镜观察主要特征为,表面可见多个由骨片环形堆积而起的凸起结构。横断面可见多个凹型结构,凹型结构由指向中心点的骨刺整齐排列形成。纵切面可见排列紧密的片状骨刺。理化鉴别方面,有机试剂浸泡红珊瑚,溶液无颜色变化,遇酸起泡。化学成分方面,(1)无机成分:红珊瑚含有丰富的宏量元素及人体必需微量元素,依次含量为Ca(62200 mg/kg)、Mg(13310 mg/kg)、Sr(2373 mg/kg)、Na(1494 mg/kg)、Fe(1321 mg/kg)、K(198 mg/kg)、Zn(25.59 mg/kg)、Ba(13.65 mg/kg)、Mn(1.839mg/kg)、Cu(1.465 mg/kg)、Cr(0.6567 mg/kg)。(2)有机成分:红珊瑚的石油醚提取物中分析出16种化合物,含有烷烃类、脂类、醇类、角鲨烷、鲨烯等有机化合物;其中邻苯二甲酸二丁酯相对含量70.239%、1,2-苯二甲酸二(2-甲基丙基)酯7.168%、邻苯二甲酸单二甲基环己酯6.232%。用梯度提取方法提取红珊瑚的有机化合物,利用硅胶柱子、Sephadex LH-20柱分离单体化合物,并利用HPLC纯化。根据化合物的理化性质与其波谱数据进行结构鉴定,得到5个化合物,分别为:邻苯二甲酸异丁酯(1)、邻苯二甲酸正丁酯(2)、咔唑(3)、对羟基苯甲酸(4)、6(5H)-菲啶酮(5);均为首次从红珊瑚中分离得到。药理活性方面,(1)对血液流变学的影响:采用“暴怒、寒邪”病因血瘀模型大鼠,以抗血小板凝集药阿司匹林为阳性对照,研究红珊瑚对血瘀模型大鼠血液流变学的影响及机制的研究。研究表明,当大鼠受“暴怒,寒邪”侵袭后可引起血管壁损坏,肝脏偶见点状坏死灶,给药红珊瑚后可降低大鼠血管损伤和肝脏坏死等病变;红珊瑚可降低不同切变率下的全血粘度和血浆粘度值,差异均有统计学意义(P<0.05);其机理与调节血小板凝集相关,经实验发现红珊瑚能够使血瘀模型大鼠血浆TXB2含量降低,增高6-keto-PGF1α水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。调节TXB2/6-keto-PGF1α比值;同时能够降低血瘀模型大鼠血浆PF4、β-TG水平,并且使大鼠血浆ET-1含量降低,升高NOS水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)促进骨折愈合作用:通过建立大鼠桡骨骨折模型,以红珊瑚为研究对象,通过X射线透视与HE染色更直观评价骨折部位的改变,同时结合血清指标ALP、Ca、P的含量变化评价红珊瑚的促进骨折愈合作用。X射线影像显示给药第10 d时红珊瑚高剂量组大鼠骨折端边缘线变模糊,20 d时骨折断端骨痂增多,密度增深,边缘接近消失,30 d时骨痂填满骨折缺损,完全愈合。骨折部位HE染色可以看出红珊瑚剂量组大鼠骨折处纤维组织多,骨痂形成速度较其他组更快,红珊瑚高剂量组的骨折愈合周期较其他组更短。红珊瑚高剂量组血清中Ca、P水平逐渐增高,并明显高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ALP含量有先升后降趋势,较其他组先出现且明显,差异有统计学意义(P<0.05)。本文提供了红珊瑚的药材鉴别依据,同时分析其化学成分,石油醚提取物进行GC-MS分析出16种化合物,其它提取物进行分离、纯化、鉴定出5个单体。并实验验证红珊瑚具有促进骨折愈合作用,其机制可能与调节体内Ca、P并影响机体血液流变有关。
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