子痫前期患者外周血CD<,4><'+>CD<,25><'+>Foxp3<'+>T细胞水平及蜕膜组织Foxp3蛋

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目的:   子痫前期(preeclampsia,PE)是妊娠期特发性疾病,发病率在我国为9-12%,是导致孕产妇及围生儿死亡的重要原因,至今仍是围产医学研究的重点。许多研究表明,母胎免疫耐受失衡是PE发病的中心环节之一。CD4+CD25+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)是一群重要的具有免疫抑制功能的T细胞亚群。近年研究表明在妊娠的各个时期,母体外周血、蜕膜以及胎儿脐带血中都有CD4+CD25+Treg的存在,提示其抑制母体外周及母胎表面母体产生的针对胎儿的特异性T细胞的增值、活化,表明其不但参与了母胎免疫耐受机制的形成而且对其维持有重要作用。目前认为CD4+CD25+Treg是妊娠过程中主要的免疫耐受调节者。2003年Fontenot等报道X染色体编码转录因子Foxp3蛋白特异性表达于CD4+CD25+Treg,是目前比较公认的CD4+CD25+Treg的特异性标志。本文检测子痫前期患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平的变化及胎盘附着处蜕膜组织Foxp3蛋白表达的变化,以探讨其在子痫前期免疫耐受失衡中的作用。   材料与方法:   选择2009年6月-2010年1月在中国医科大学附属盛京医院及第四医院产科病房住院患者,诊断标准参照乐杰主编第7版《妇产科学》诊断标准。既往均无高血压、糖尿病、甲亢等自身免疫性疾病病史,无其他妊娠合并症,无传染病病史。   1、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg的水平   子痫前期患者20例,正常晚期妊娠患者20例,两组间年龄与孕周差异无显著性。晨起采集各组孕妇空腹肘正中静脉血5毫升,肝素抗凝,采集标本后以淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞,计数细胞后调整细胞浓度为1×107/mL,经免疫荧光染色及细胞内因子染色后在4小时内上流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Foxp3+占CD4+CD25+T细胞的比例。   2、蜕膜组织中Foxp3蛋白的表达   子痫前期患者30例,正常晚期妊娠患者30例,两组间年龄与孕周差异无显著性。剖宫产术中胎盘娩出后立即刮取宫壁胎盘附着处底蜕膜组织约1.5克,经PBS冲洗,置于4%多聚甲醛液中固定24-48小时,常规石蜡包埋,连续切片进行免疫组织化学染色,检测蜕膜组织中CD4+CD25+Treg的特异性转录因子Foxp3蛋白的表达。   实验结果:   1、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达率(x±s):子痫前期组1.70±0.23%;正常对照组3.55±0.47%。子痫前期组明显低于正常晚期妊娠对照组(t值分别为3.51,P<0.05),差异显著,有统计学意义。   2、蜕膜组织中Foxp3蛋白的表达比较阳性率分别为:子痫前期组16.67%;正常对照组66.67%。子痫前期组Foxp3表达阳性率明显低于正常对照组(p<0.05),差异显著,有统计学意义。   结论:   子痫前期患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平和蜕膜组织中Foxp3蛋白表达均低于正常妊娠晚期妇女,提示子痫前期患者外周血与蜕膜中CD4+CD25+调节性T细胞数量减少,免疫抑制功能减弱,从而使母胎免疫耐受失衡,免疫排斥作用增强,导致子痫前期的发生。
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