论文部分内容阅读
目的:研究雷公藤甲素(triptolide)对子宫内膜癌HEC-1B细胞生长和凋亡的调节作用,探讨其促进子宫内膜癌细胞凋亡的作用途径。方法:细胞培养,将HEC-1B细胞培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM培养液中,于37℃、5%CO2培养箱中培养,细胞呈单层贴壁生长,选用对数生长期细胞进行实验。⑴将雷公藤甲素按照(10、20、40、80、160及320nM)加入细胞中培养24、48、72h,细胞增殖/毒性测试试剂(CCK-8)测定雷公藤甲素对HEC-1B细胞的生长抑制作用及加入caspase抑制剂(z-VAD-fmk)后对其作用的影响;⑵流式细胞仪及Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡情况;⑶real-time PCR测定雷公藤甲素对HEC-1B细胞内bcl-2、bax mRNA水平变化的影响;⑷western blot法检测用药后caspase-3/9、bcl-2、bax、p53蛋白表达情况及z-VAD-fmk对caspase-3、9蛋白表达的影响。结果:CCK-8比色法显示雷公藤甲素对子宫内膜癌HEC-1B细胞的生长有明显的抑制作用,且存在时间和浓度依赖性(P<0.01),在48h、72h时作用效果明显。加入z-VAD-fmk后,雷公藤甲素对HEC-1B细胞生长抑制作用显著下降但仍高于对照组(P<0.01),western blot结果同样证明z-VAD-fmk对caspase-3、9蛋白的表达有一定的减弱但仍高于对照组(P<0.05)。流式细胞仪及Hoechst33342荧光染色证明雷公藤甲素促进HEC-1B细胞凋亡,且早期凋亡多于晚期凋亡(P<0.05)。随着药物浓度的增加caspase-3/9、p53蛋白表达逐渐升高,同时bcl-2蛋白的表达逐渐降低,而bax蛋白表达没有明显变化与real-time PCR结果相符(P<0.05)。结论:雷公藤甲素对子宫内膜癌HEC-1B细胞的生长有明显的抑制作用,通过caspase-3/9蛋白随着药物浓度的增加表达呈上升趋势伴随着bcl-2蛋白表达的减少,有明显的浓度和时间依赖性,表明依赖于caspase的线粒体凋亡途径在雷公藤甲素促进子宫内膜癌HEC-1B细胞凋亡的过程中起明显作用。同时p53蛋白水平随着药物浓度的增加逐渐升高,而bax蛋白的表达水平并没有升高,说明p53途径并没有在雷公藤甲素促进细胞凋亡的过程中发挥作用。