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目的:近来人们发现糖尿病与部分肿瘤的发生发展密切相关。在女性2型糖尿病患者中,乳腺癌发病率显著高于非糖尿病患者。已有文献报道,二甲双胍可通过激活AMPK信号转导通路改善乳腺癌患者的预后。利拉鲁肽是GLP-1的类似物,已广泛应用于糖尿病患者的降糖治疗。利拉鲁肽可通过激活AMPK信号转导通路发挥降糖以外生物学作用。那么,利拉鲁肽是否亦可通过激活AMPK信号转导通路影响乳腺癌细胞的增殖、凋亡尚不清楚。miR-27a有原癌基因活性,在乳腺癌,胃癌,结肠癌,子宫内膜癌等多种肿瘤细胞中呈高表达,具有调控乳腺癌细胞凋亡及细胞周期等功能。Targetscan网站预测AMPKa2可能是miR-27a的靶基因。AMPKa2表达在乳腺癌细胞MCF-7中广泛受到抑制,具有肿瘤抑制因子的作用。综上所述,利拉鲁肽是否可以通过影响miR-27a表达,进而上调AMPKa2表达,发挥抗肿瘤作用目前并不清楚。因此在我们研究中,以MCF-7(人乳腺癌)细胞为研究对象,探讨利拉鲁肽对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响,并从miRNA层面探索其可能机制。方法:1.不同浓度利拉鲁肽(10n M、100n M、1000n M、10000n M)干预MCF-7细胞48h,应用CCK-8方法检测MCF-7细胞增殖抑制率。2.给予MCF-7细胞1000n M利拉鲁肽干预24h、48h、72h,应用CCK-8方法检测MCF-7细胞增殖抑制率。3.给予MCF-7细胞1000n M利拉鲁肽干预48h,应用平板克隆形成实验检测人乳腺癌MCF-7细胞克隆形成率;应用流式细胞仪检测MCF-7细胞早期和晚期凋亡率。4.不同浓度利拉鲁肽(10n M、100n M、1000n M)干预MCF-7细胞48h,应用实时荧光定量PCR方法检测MCF-7细胞miR-27a及AMPKα2 m RNA表达水平;应用Western Blotting方法检测AMPKα2蛋白表达水平。5.miR-27a mimics和inhibitor转染MCF-7细胞48h,应用实时荧光定量PCR和Western Blotting方法检测MCF-7细胞AMPKα2表达水平。6.双荧光素报告酶基因分析实验验证miR-27a可结合AMPKα2 3’-UTR。7.miR-27a mimics和inhibitor转染MCF-7细胞48h,应用CCK-8方法检测MCF-7细胞光密度值,并计算细胞增殖抑制率;应用流式细胞仪检测MCF-7细胞早期和晚期凋亡率;应用Western Blotting方法检测PCNA、caspase-3蛋白表达水平。结果:1.不同浓度利拉鲁肽(10n M、100n M、1000n M、10000n M)干预MCF-7细胞48h,MCF-7细胞增殖抑制率分别为10.3%,37.34%,58.8%,以及89.27%,具有统计学差异(P<0.05)。2.给予MCF-7细胞1000n M利拉鲁肽干预24h、48h、72h,MCF-7细胞增殖抑制率分别为13.11%,45.3%以及53.59%,具有统计学差异(P<0.05)。3.给予MCF-7细胞1000n M利拉鲁肽干预48h,MCF-7细胞克隆形成率为对照组的69.37%(P<0.05);早期、晚期凋亡率分别为1.26%±0.18%、6.06%±0.32%,与空载体组(0.81%±0.13%、4.27%±0.26%)比较,两组晚期凋亡率存在统计学差异(P<0.05)。4.不同浓度利拉鲁肽(10n M、100n M、1000n M)干预MCF-7细胞48h,miR-27a表达较对照组分别降低15.5%、44.5%、61.8%;AMPKα2 m RNA表达较对照组分别增加1.61倍、6.63倍和9.25倍;AMPKα2蛋白表达分别增加1.5倍、4.0倍和6.8倍,差别具有统计学意义(P<0.05)。5.双荧光素酶报告基因实验显示,AMPKα2野生型3’UTR基因报告质粒与miR-27a共转染后,荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。6.miR-27a mimics转染MCF-7细胞48h,miR-27a表达量约为阴性对照组3.33倍;AMPKα2 m RNA、蛋白表达分别下调57.77%、52.55%(P<0.05);miR-27a inhibitor转染MCF-7细胞48h,miR-27a表达量为阴性对照组的43.19%;AMPKα2m RNA、蛋白表达分别增加1.61倍、2.27倍(P<0.05)。7.miR-27a mimics转染MCF-7细胞48h,两组早期、晚期凋亡率分别为0.79%±0.09%、2.16%±0.41%,与空载体组(0.88%±0.11%、4.71%±0.23%)比较,晚期凋亡百分比差别具有统计学意义(P<0.05);PCNA蛋白表达增加2倍、caspase-3蛋白表达降低28.56%(P<0.05)。miR-27a inhibitor转染MCF-7细胞48h,miR-27a inhibitor组的增殖抑制率为56.78%±2.24%。两组早期、晚期凋亡率分别为1.31%±0.07%、6.91%±0.27%,与空载体组(0.88%±0.11%、4.71%±0.23%)比较,两组晚期凋亡百分比差别具有统计学意义(P<0.05);PCNA蛋白表达减低43.22%、caspase-3蛋白表达增加2.1倍(P<0.05)。结论:利拉鲁肽抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用呈浓度依赖性和时间依赖性,且能促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能与利拉鲁肽下调miR-27a表达,通过miR-27a靶基因AMPKα2表达水平上调来抑制PCNA表达,及促进caspase-3表达来发挥抗乳腺癌作用相关。