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第一部分大泡性角膜病变动物模型的建立目的在兔眼上建立一种稳定、持久的角膜内皮损伤方法，从而建立适合评价角膜内皮移植术治疗大泡性角膜病变(bullous keratopathy，BK)的模型。方法48只成年新西兰大白兔，随机分为两组，每组24只，右眼为手术眼。A组：从角膜缘内1mm用5号一次性注射针头，针头尖端弯成90度角，距离其1.0mm处向针头尖端方向再弯一个钝角，自穿刺口进入前房刮除全部后弹力膜Descemet’s membrane，DM)和内皮细胞层。B组：单纯刮除角膜内皮细胞层。术后采用裂隙灯及眼前节相干光断层扫描仪(Visante OCT)观察角膜水肿混浊程度和角膜厚度，用角膜内皮镜计数角膜内皮细胞密度，并行角膜内皮细胞染色及组织学检查。结果A组术后3个月角膜仍明显混浊水肿，厚度是术前3-4倍；而B组角膜于术后21d开始恢复透明，术后3个月角膜内皮细胞计数及厚度恢复正常。结论采用机械损伤法刮除后弹力膜和内皮层可以建立稳定、持久的兔角膜内皮细胞损伤模型。第二部分大泡性角膜病变角膜内皮移植术实验研究目的探讨BK的角膜内皮移植，为BK治疗提供新的方法和实验依据。方法将新西兰大白兔40只分3组：A组为正常角膜对照组5只5眼；B组为BK对照组5只5眼；C组为实验性BK行后弹力膜内皮移植术组30只30眼。所有组右眼为手术眼。裂隙灯下分别观察三组1d、3d、7d、14d、21d、28d及3月的角膜透明性，观察C组角膜内皮植片贴附情况，角膜厚度及并发症；角膜内皮镜计数B组和C组角膜内皮移植术后21d、28d及3月内皮细胞密度；茜素红锥蓝内皮染色观察角膜内皮细胞；组织学观察A组和B组角膜及C组术后7d、14d、21d及28d角膜植片和受体角膜间的界面瘢痕情况；Visante OCT观察A组和B组角膜及C组术后1(1、7d、14d、21d、28d和3月角膜情况及中央角膜厚度变化情况；并于1d、3d、7d、14d和21d对三组房水细胞进行瑞氏染色法观察。结果A组角膜透明，B组角膜水肿持续存在。C组术后7d角膜内皮贴附好，21d后角膜开始恢复透明，角膜内皮植片和受体愈合良好，层间无明显瘢痕形成。B组不能显示角膜内皮细胞层，C组21d时角膜内皮细胞排列整齐，角膜内皮细胞有一定丢，28d内皮细胞继续少量丢失，3月后内皮细胞趋于稳定。Visante OCT检测A组角膜结构完整，排列整齐；B组观察3个月角膜仍然水肿，基质排列疏松，未见内皮层反光带：C组7d时角膜结构完整，植床与植片之间可看到不明显的移植的界面，14d时角膜较前变薄，可见内皮层反光带，21d植床与植片之间看不到移植的界面，中央角膜厚度趋于稳定。A组房水涂片镜检不到房水细胞，B组3d时瑞氏染色可见较多淋巴细胞和单核巨噬细胞，而相同时间的C组仅见少量淋巴细胞和单核巨噬细胞，10d后基本镜检不到房水细胞。结论本实验研究表明直接行角膜内皮移植手术方式简单，安全，而且损伤小，术后眼内反应轻，为我们临床上治疗BK提供一种新的选择方式。PartⅢ正常角膜保留后弹力膜角膜内皮移植术实验研究目的探讨正常角膜保留后弹力膜及内皮细胞层的角膜内皮移植术，研究角膜内皮移植的帖附情况及机理。方法将新西兰大白兔50只分4组：A组为正常角膜对照组5只5眼；B组为BK对照组5只5眼；C组为实验性正常角膜行后弹力膜内皮移植术组20只20眼；D组正常角膜行后弹力膜内皮移植术后再撕除移植片20只20眼。所有组右眼为手术眼，其中D组在正常角膜行后弹力膜内皮移植术后分别于3d、7d、14d和21d再撕除移植片。裂隙灯下分别观察A组、B组和C组1d、3d、7d、14d、21d、28d及3月的角膜透明性，观察C组角膜内皮植片贴附情况，角膜厚度及并发症，观察D组3d、7d、14d和21d时撕除移植片后1d、3d、7d、14d和21d的角膜情况。角膜内皮镜计数A组和B组角膜内皮密度情况及C组角膜内皮移植术后21d、28d及3月内皮细胞密度，计数D组分别于3d、7d、14d和21d撕除移植片后21d、28d及3月的角膜内皮细胞密度。组织学观察A组和B组角膜情况及C组术后7d、14d、21d及28d角膜植片和受体角膜间的界面瘢痕情况，观察D组分别于3d、7d、14d和21d撕除移植片后1d、7d、14d、21d、28d和3月的角膜形态改变。Visante OCT观察A组和B组角膜及C组术后1d、7d、14d、21d、28d和3月角膜情况及中央角膜厚度变化情况，观察D组分别于3d、7d、14d和21d撕除移植片后1d、7d、14d、21d、28d和3个月的角膜情况及中央角膜厚度变化情况。并于1d、3d、7d、14d、21d和28d对四组房水细胞进行瑞氏染色法观察。结果A组角膜透明；B组观察3月角膜水肿，角膜基质排列疏松；C组术后7d角膜内皮贴附好，14d后角膜恢复透明，角膜内皮植片和受体愈合良好，层间无明显瘢痕形成。B组不能显示角膜内皮细胞层，7d时C组角膜内皮细胞排列整齐，14d时角膜内皮细胞少量丢失，细胞密度计数减少，21d内皮细胞继续少量减少，28d后内皮细胞趋于稳定。D组在移植术后第3d时可以较容易撕下移植片，第7d时可以完整撕下移植片，但移植片已与植床粘连贴附，14d天时移植片撕除困难，对内皮损伤较大，21d时几乎不能撕除移植片，移植片已与植床粘连贴附紧密。Visante OCT检测A组角膜结构完整，排列整齐；B组观察3个月角膜仍然水肿，基质排列疏松，未见内皮层反光带；C组7d时角膜结构完整，植床与植片之间可看到不明显的移植的界面，14d时角膜水肿明显减轻，角膜较前变薄，植床与植片之间无明显瘢痕存在，可见内皮层反光带，21d后中央角膜厚度趋于稳定；D组在移植术后3d和7d时撕除移植片1d时角膜轻度水肿，厚度增加，角膜基质排列稍疏松，3d后角膜水肿基本消失，7d时角膜结构完整，排列整齐，在移植术后14d时撕除移植片1d时角膜水肿明显，厚度增加，角膜基质排列稍疏松，内皮层不完整，7d时角膜水肿稍减轻，内皮层完整。A组房水涂片镜检不到房水细胞，1d和3d时B组瑞氏染色可见较多淋巴细胞和单核巨噬细胞，而相同时间的C组仅见少量淋巴细胞和单核巨噬细胞，10d后基本镜检不到房水细胞。D组在撕除移植片1d时瑞氏染色可见较多淋巴细胞和单核巨噬细胞，3d后淋巴细胞和单核巨噬细胞减少，10d后基本镜检不到房水细胞。结论本实验研究表明角膜内皮移植片可以和保留后弹力膜内皮细胞层贴附，随时间延长贴附越紧密，且角膜内皮移植片可以存活并发挥功能，而正常的角膜内皮层细胞受到干扰后，逐渐损伤失活，失去功能。