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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是我国重要的淡水养殖鱼类,为初步分析草鱼2代选育进展,本研究通过养殖桶养殖与同池混养相结合的方式对草鱼F1代与F2代群体的生长性状进行了对比;运用线粒体DNA部分片段和多重SSR-PCR体系对选育群体进行了遗传性能的分析.为今后进一步对不同草鱼群体生长与抗病性能之间的比较和选育进展的进一步分析做铺垫,本研究对 GH 基因中与生长性状相关的SNP位点进行了初步开发;并初步分析了草鱼在感染嗜水气单胞菌后肝脏的病理学变化.以上研究结果为今后制定出更加合理有效的选育方案提供了有力的参考,研究包括以下五个方面: 1. 采用养殖桶养殖与同池混养相结合的方式对草鱼F1代、F2代群体的生长性状进行对比.实验结果表明,在整个450日龄,F2代群体的体质量显著高于F1代群体(除30日龄);F2代群体线性回归方程的斜率(a值)比F1代群体大,反映出F2代群体日增重更大;在150日龄,F2代群体的瞬时增重率(SGR)、相对增重率(RGR)和绝对增重率(AGR)分别比F1代群体高0.91%、4.92%和14.77%;在450日龄,F2代群体以上3种参数分别比F1代群体高0.36%、2.70%和12.38%;F2代群体平均体重变异系数相比F1代群体降低了16.54%.以上结果表明,经过1代选育之后,草鱼F2代群体相比F1代群体,其生长速度更快、规格更整齐. 2. 在本研究中,我们对2个选育群体(F1、F2)和4个野生群体(邗江、九江、石首、吴江)进行了线粒体DNA控制区(D-loop)序列的遗传变异分析.实验结果表明,4个野生群体在多个遗传多样性指数水平上均高于2个选育群体,在2 个选育群体内表现为 F1 代群体的遗传多样性高于 F2 代群体,但单倍型多样性(Hd)低于F2代群体;单倍型分析、遗传分化指数(Fst)、邻接(Neighbor-Joining, NJ)进化树和单倍型网络图分析结果表明,2个选育群体与邗江、九江、吴江3个野生群体之间的亲缘关系较远,与石首群体之间的亲缘关系较近.以上结果表明,经过 2 个世代的选择育种,选育群体的遗传多样性有所下降,其遗传结构已发生了一些改变. 3. 为进一步对选育群体的遗传性能进行分析,本研究采用多重PCR体系对2个选育群体(F1代和F2代)和4个野生群体(邗江、九江、石首、吴江)进行了微卫星序列遗传变异分析.实验结果表明,6 个草鱼群体遗传多样性水平较高,2个选育群体除了平均等位基因数(Na)外,其他遗传多样性参数均小于4个野生群体.AMOVA分析、遗传分化指数(Fst)、奈氏标准遗传距离(Dn)和UPGMA系统发育树分析结果表明,6个草鱼群体整体处于低度分化,2个选育群体和4个野生群体之间产生了一定程度的遗传分化,但分化程度尚不明显.以上结果表明,经过 2 个世代选育后,2 个选育群体遗传多样性虽有部分下降,但仍处于较高的水平,其遗传分化程度尚不明显. 4. 为筛选草鱼GH基因中与生长性状相关的SNP位点以便于后续草鱼群体生长性状的比较与选育进展的分析,在本实验中,共筛选到GH基因3部分序列中的9个变异位点,其均未显著偏离Hardy-Weinberg平衡,且均表现为中等多态性;研究发现SNP2和SNP3位点的纯合突变型在体重、体长和粗脂肪性状上均显著高于野生型和杂合突变型,并且在双倍型分析时得出了相似的结果.以上结果表明,草鱼GH基因中SNP2和SNP3位点与早期生长性状存在显著性相关,可作为草鱼群体生长性状的比较与选育进展分析的候选辅助分子标记. 5. 为今后进一步对不同草鱼群体抗病性能之间的比较与选育进展的分析做铺垫,在本研究中,我们检测了草鱼感染嗜水气单胞菌后生物学指数和肝脏免疫酶活的变化,并运用半定量体系量化了肝脏的组织病变.实验结果表明,肝体指数(LSI)在功毒后第 3 天出现显著性下降现象,并发现其数值变化相比与弗氏指数(CF)更为敏感;肝脏内过氧化物酶(POD),碱性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP)在功毒后第1、3、5天出现明显升高现象;在组织学水平,研究表明功毒后第3、5、7天的肝脏病变更为明显.