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肾小球系膜细胞异常增殖是多种肾小球疾病共同的病理改变特征。设法控制系膜细胞增殖对争取肾小球损伤的逆转和防止其转向慢性演变有重要意义。川芎嗪是常用中药川芎根茎的生物碱中分离出的活性成分,具有多种药理学效应,在肾脏疾病方面现已被广泛应用于治疗多种肾小球疾病、慢性肾功衰、肾病综合症等。本文研究了川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响,并进一步从细胞周期、细胞凋亡和细胞间粘附分子-1的表达等方面探讨川芎嗪抑制增殖的可能机制,旨在从细胞水平初步探讨川芎嗪治疗肾病的作用机制,为临床更好的应用川芎嗪治疗肾病提供实验依据。 本研究通过体外培养大鼠肾小球系膜细胞,采用噻唑蓝比色法和苔盼蓝排斥法观察了川芎嗪对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞生长曲线变化情况;并进一步采用流式细胞术检测了细胞周期和细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测了细胞周期素激酶抑制剂P27、凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax和细胞间粘附分子-1的表达情况。 结果发现,川芎嗪在400~2500mg/L浓度范围内可明显抑制脂多糖诱导肾小球系膜细胞的增殖,并随着药物剂量增大而抑制作用增强,川芎嗪浓度为400mg/L时抑制率为25%,浓度升至2500mg/L时,抑制率可达65.9%,呈明显的剂量依赖关系。细胞生长曲线的变化也显示,500mg/L川芎嗪可使系膜细胞的生长逐渐变得缓慢,2500mg/L川芎嗪则明显的抑制系膜细胞的生长。进一步对细胞周期分析发现,川芎嗪可使细胞停滞于G0/G1期,使G0/G1期细胞比例增高,S+G2/M期细胞比例下降,导致细胞增殖指数下降,可从脂多糖组的44.28%下降为36.21%。同时,脂多糖诱导系膜细胞增殖时,细胞周期素激酶抑制剂P27蛋白表达明显下调,川芎嗪可上调其表达,100、500、2500mg/L川芎嗪组较脂多糖组分别上调1.35、1.52、1.82倍(P<0.05,P<0.01)。细胞凋亡结果显示,2500mg/L川芎嗪可明显促进肾小球系膜细胞调亡,凋亡率为29.8%。同时,100、500、2500mg/L川芎嗪组凋亡蛋白Bcl-2表达较脂多糖组分别下调15.79%、29.19%、46.41%(P<0.05;P<0.01),Bax的表达无明显变化,但Bcl-2/Bax比率较脂多糖组呈下降趋势。对肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子一l的检测发现,脂多糖可诱导其表达增强,为对照组的3倍(尸<0 .01),随着川芍嗦剂量的增加,细胞间粘附分子一1表达逐渐降低,100、500、250Omg/L川芍嗦使细胞间粘附分子一1的表达较脂多糖组分别下调14.05%、23.97%、30.58%(P<0.05,P<0.01)。 上述研究结果提示,川芍嗦对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用可能与川芍啧调节细胞周期、促进细胞凋亡以及降低细胞间粘附分子一1表达水平有关,而影响细胞周期和凋亡的机制则可能与调节细胞周期素激酶抑制剂P27和凋亡蛋白Bcl一2、Bax的表达有关。