拟南芥叶绿体定位的mTERF9的功能研究

来源 :上海师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangmingjie
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叶绿体基因表达对植物光合作用及发育至关重要,但是我们对其调控机制却知之甚少。在动物中,线粒体转录终止因子(mTERF)家族成员在线粒体基因的表达过程中发挥着重要作用,然而目前对光合生物中mTERFs的功能研究较少,其功能机制尚不明确。在本研究中,我们选取拟南芥mTERF成员mTERF9作为研究对象,对其功能进行研究。首先,我们获得了该基因T-DNA插入的纯合突变体mterf9,其生长缓慢且具有明显的黄化表型。构建mTERF9融合4×MYC标签的转基因互补植株,并以此为材料,分离其叶绿体,基质,类囊体,利用特异的MYC抗体对其进行亚细胞精细定位,检测结果显示其主要定位在叶绿体基质中。对突变体mterf9的光系统相关蛋白的积累水平进行检测,检测结果显示Psad、Psba、Rbcs、RbcL蛋白积累水平显著下降。对mterf9的叶绿体相关基因表达活性进行检测,qRT-PCR显示其PEP相关基因表达下调,NEP相关基因表达上调。利用Northern blot实验进行进一步验证,结果表明在mterf9突变体中,psbA、rbcL、accD的表达没有明显变化,但多顺反子petD的转录本模式变化明显,含内含子的petD转录本增加。该结果显示mTERF9可能参与拟南芥叶绿体基因内含子的剪接。我们进一步对mterf9的叶绿体RNA编辑位点进行检测,结果显示与野生型相比atpF、clpP、ndhB-2、ndhB-3、ndhB-6、ndhB-7编辑位点的编辑效率下降明显。RNA免疫共沉淀(RIP)实验表明mTERF9蛋白能够与ndhB-6,ndhB-7附近的转录本免疫共沉淀。以上研究结果表明mTERF9蛋白参与叶绿体RNA的编辑和内含子剪接过程,是叶绿体基因转录后加工的重要调控因子。
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