目的:研究金钗石斛生物碱（DNLA）对CCl₄诱导的小鼠肝脏线粒体氧化损伤的保护作用及其机制。方法:选取C57BL/6J野生型小鼠（Wild-type,WT）和Nrf2基因敲除小鼠(Nrf2-knockout,Nrf2^-/-)各40只,随机分为正常对照组、CCl₄模型组、DNLA 10mg/kg和DNLA 20 mg/kg组。连续灌胃7天,除正常对照组外,其余各组在末次给药2 h后,腹腔注射0.2%CCl₄（20μL/kg,ip）建立急性肝损伤模型,于24 h后取材。检测小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）含量,HE染色观察肝组织形态学,透射电镜观察肝脏超微结构;流式细胞仪检测肝细胞内活性氧的含量,提取肝脏线粒体,检测线粒体中过氧化氢（H₂O₂）、丙二醛（MDA）的含量;通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量。用试剂盒检测线粒体中锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）的活性和还原型谷胱甘肽（GSH）的含量;使用ATP试剂盒检测肝组织中的ATP含量;用Oxygraph-2k线粒体呼吸功能仪测定肝细胞线粒体的呼吸功能;通过Western blot检测线粒体和细胞浆内Cyt c的蛋白表达;同时用TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况。结果:在WT小鼠中,给予DNLA后能显著降低小鼠血清中ALT,AST的含量,而在Nrf2^-/-小鼠中,给予DNLA后未能显著性降低血清中ALT,AST的含量,且病理形态学和电镜结果也显示DNLA能明显改善CCl₄引起的肝细胞变性坏死,线粒体肿胀及染色质边集化。我们进一步检测线粒体内氧化损伤相关指标发现,在WT小鼠线粒体内,DNLA能明显降低线粒体中H₂O₂、MDA和8-OHdG的含量,但在Nrf2^-/-小鼠中,DNLA给药组与CCl₄模型组相比,线粒体中H₂O₂、MDA和8-OHdG的含量未见显著差异。此外,通过对线粒体抗氧化能力的检测发现,在WT小鼠中,DNLA能明显提高线粒体内Mn-SOD活性和GSH含量,增强线粒体的抗氧化能力,但在Nrf2^-/-小鼠中,DNLA给药组的线粒体抗氧化能力未得到明显提高。在此基础上,我们进一步通过检测线粒体呼吸功能、ATP含量和肝细胞凋亡发现,CCl₄对线粒体功能具有明显的抑制作用,并且诱发肝细胞发生凋亡,而给予DNLA预处理后能够显著改善线粒体功能,减少肝细胞凋亡。在Nrf2缺失的小鼠中,DNLA对线粒体功能的保护作用较弱,且对肝细胞凋亡亦无明显改善作用。结论:DNLA对CCl₄诱导的小鼠肝脏线粒体的氧化损伤具有保护作用,其保护作用机制与Nrf2抗氧化信号通路的激活,减轻线粒体氧化损伤有关。