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近年来，探究一些有实用价值的基因在乳酸菌中的克隆和表达，构建带有食品选择标记的乳酸乳球菌表达系统已经成为乳酸菌分子生物学的研究热点。目的：构建含南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的食品级表达载体pMG36N-CALB,并在乳酸乳球菌MG1363中表达，进一步构建CALB的表面展示表达载体pMG36N-UCS，并在MG1363中表达，探索使用乳酸菌全细胞催化剂可行性。克隆构建NICE系统所需的nisA和nisRK基因，为今后构建以nisI为选择标记的NICE表达系统奠定基础。方法：1.根据GenBank中的CALB的基因序列设计引物，扩增CALB基因并克隆至pMG36e-NisI。2.PCR和双酶切鉴定重组质粒，并将重组质粒pMG36e-NisI-CALB去红霉素后电转化至乳酸乳球菌MG1363，提质粒并用PCR鉴定重组菌。3.提取乳酸乳球菌、金黄色葡萄球菌的基因组，设计引物克隆usp45、Spax。根据GenBank中的CALB的基因序列设计引物，扩增CALB。后将usp45、CALB、Spax克隆至T载体。最后将其克隆至pMG36e-NisI。4.PCR和双酶切鉴定重组质粒，并将重组质粒pMG36e-NisI-UCS去红霉素后电转化至乳酸乳球菌MG1363，PCR鉴定重组菌。5.采用吸光光度法测定脂肪酶活力，初步研究南极假丝酵母脂肪酶B的酶学性质6..提取产乳链菌肽的乳酸乳球菌的基因组，设计引物克隆nisA和nisRK，将其克隆至T载体，测序。结果：1.构建克隆载体PMG36e-NisI-CALB,表达载体pMG36N-CALB，并电转化至乳酸乳球菌MG1363。2.构建克隆载体PMG36e-NisI-UCS，表达载体pMG36N-UCS，并电转化至乳酸乳球菌MG1363。3.采用吸光度法测定南极假丝酵母脂肪酶B活力，分别从最适温度、温度的稳定性、最适pH、pH的稳定性这四方面研究，结果表明：南极假丝酵母脂肪酶B在碱性条件下具有很好的稳定性和水解活性，最适反应温度范围是40～45℃。温度较低、pH7.0～8.0之间该酶能保持较好的稳定性。4.成功克隆产乳链菌肽菌的乳菌肽前体基因nisA及nisRK至T载体。