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目的:骨质疏松症(osteoporosis,OP)是以骨量减少,骨的微观结构退化为特征的,致使骨的脆性增加而易发生骨折的一种全身性骨骼疾病。其严重的并发症是脆性骨折,其中最常见的骨折部位是髋部和脊椎。OP已经成为世界范围内公众健康问题,据统计,2000年全球骨质疏松骨折的发病例数为900万,且新增病例数(特别是髋部骨折例数)随年龄增长不断增加,值得注意的是,其中75％的髋部骨折发生在女性。女性一生当中发生髋部骨折的危险性大于乳腺癌、子宫内膜癌和卵巢癌的危险性的总和,这足以引起我们对绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoprosis,PMOP)的重视。随着妇女寿命的延长,人们对生活质量要求的提高,有关绝经后骨质疏松的病机及防治的研究已成为热点。目前已研制出多种己证实有效的药物,基本上分为骨吸收抑制剂及骨形成促进剂两大类,中药治疗本病,亦证实有肯定的疗效,且副作用小,并兼有维持骨量的作用。补充钙剂及维生素D制剂在骨质疏松的治疗是必不可少的,并已肯定可提高其它抗骨疏松药物的治疗效果。激素替代治疗(hormone replacementtherapy,HRT)是目前已知疗效最确切的抗骨吸收疗法,但长期应用的风险性限制了它的应用。双膦酸盐作用亦已得到肯定,且只作用于骨,不作用于全身,此种特点有利有弊,降钙素(calcitonin)是人和动物体内调节钙代谢的重要激素之一,它能特异性的直接作用于破骨细胞,减低它的活力和数量,从而抑制骨吸收,但价格较昂。正如中医学认为骨质疏松是机体整体性的失衡衰老的一种表现而已,单一因素的补充疗法常难取得最理想的整体疗效,且有一定的副作用,而中药治疗是通过对机体的全身性调节使机体恢复平衡状态而达到治疗骨质疏松的目的。中医理论认为七七肾气虚,天癸竭,冲任虚衰引起脏腑功能失调是造成围绝经期综合症的根本原因,治疗时补益肾气调节阴阳平衡固然重要,还应兼顾脾胃后天之本,脾胃健运,气血充盈,化源不竭,滋养脏腑功能,使已衰之肾气得后天精微的充分滋养,有望减缓衰势,建立新的平衡,而且健脾还可加强胃肠道对钙剂的吸收功能,补肾法治疗绝经后骨质疏松具有一定的理论依据,现代药理研究发现,菟丝子、仙茅、仙灵脾、熟地、麦冬等补肾中药含有黄酮类物质,具有植物雌激素的作用特点。本实验以去卵巢大鼠建立PMOP模型,通过运脾滋肾汤(Yun pizi shen decoction)对去卵巢大鼠骨质疏松的疗效观察及与对照组的比较分析,测定各组大鼠股骨骨密度,血清钙、磷、碱性磷酸酶、雌二醇、骨钙素水平等指标,了解运脾滋肾汤对去卵巢大鼠骨丢失的影响及可能的作用机制,为临床应用运脾滋肾汤治疗绝经后妇女骨质疏松提供证据,并为临床医师针对不同情况的患者而选择最适宜的药物治疗方案提供参考。进而探讨PMOP发病机制以及为临床PMOP防治用药选择提供实验依据。
方法:
1动物分组和PMOP动物模型的建立
3月龄成年雌性Sprague/Dawley大鼠40只,随机分为4组,每组10只:①假手术(Sham)组、②卵巢切除(OVX)组、③卵巢切除+尼尔雌醇(OVX+E)组、④卵巢切除+运脾滋肾汤(OVX+Y)组。将大鼠以10％水合氯醛(100mg/kg)腹腔注射麻醉,无菌条件下,经腰背部正中纵行切口进入腹腔背侧,将②-④组大鼠切除双侧卵巢,①组大鼠切除双侧卵巢下方少许脂肪组织,重量约与卵巢相同。于去卵巢术后7天起,分别对各组大鼠进行灌胃给药,12周后处死全部大鼠。OVX+E组给予尼尔雌醇1.0mg·kg-1·w-1,OVX+Y组给予运脾滋肾汤(6.5ml/kg),每日1次,Sham组及OVX组分别给予同体积0.9％氯化钠注射液,每日1次。给药剂量每周按体重校正1次。
2双能X线吸收法确立PMOP动物模型
于去势后12周,分别取各组大鼠置于Osteocore3型双能X线骨密仪上,通过计算机系统中心动物软件,测量每只大鼠双侧股骨骨密度(BMD),取平均值。BMD值用g/cm2表示。
3标本的制备
12周后处死全部大鼠,留取全血后,于低温超速离心机离心后取血清待检;称取大鼠子宫湿重,于大鼠双角子宫分叉处上方5 mm处取材,常规石蜡包埋,HE染色,测量子宫内膜厚度。并以放免分析法测定血清钙、磷、碱性磷酸酶、性激素、骨钙素水平等代谢指标。
4结果判定与图像分析统计学分析实验结果应用SPSS13.0软件统计分析。所测数值均以均数±标准差((X)±S)表示,方差齐性检验采用Levene法,各组间变量比较采用完全随机的单因素方差分析,并采用SNK法进行两两比较;相关性分析用pearson积差相关分析。P＜0.05被认为差异有统计学意义。
结果:
1试验前后各组大鼠体重变化
实验前各组大鼠体重无明显差别。实验12周后,(与)Sham组相比:OVX和OVX-Y组大鼠体重增加(P＜0.05;P＜0.05);OVX+E组大鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05)。与OVX组相比:OVX+E组及OVX+Y组大鼠体重下降(P＜0.05,P＜0.05)。与OVX+E组相比:OVX+Y组大鼠体重无明显变化(P＞0.05)。
2各组大鼠实验后子宫/体重指数和子宫内膜厚度的比较
与Sham组相比:OVX组子宫/体重指数明显减少、子宫内膜明显变薄(P＜0.05,P＜0.05);OVX+E组子宫/体重指数明显增加、子宫内膜明显增厚(P＜0.05,P＜0.05);OVX+Y组则无显著性差异(P＞0.05,P＞0.05)。与OVX组相比:OVX+E组子宫/体重指数明显增加、子宫内膜明显增厚(P＜0.05,P＜0.05);OVX+Y组无显著性差异(P＞005,P＞0.05)。与OVX+E组相比:OVX+Y组大鼠子宫/体重指数小,子宫内膜厚度薄,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.05)。
3各组大鼠股骨BMD比较
与Sham组相比:OVX组大鼠BMD下降(P＜0.05);OVX+E组大鼠BMD无明显变化(P＞0.05)。与OVX组相比:OVX+E组及OVX+Y组大鼠BMD明显增加(P＜0.05;P＜0.05)。与OVX+E组相比:OVX+Y组大鼠BMD无明显差别(P＞0.05)。
4各组大鼠血清钙、磷浓度的比较
与Sham组比较,OVX组和OVX+Y组血清钙、磷浓度明显减低(P＜0.05)。与OVX组比较,OVX+E组血清钙、磷浓度明显升高(P＜0.05),OVX+Y组血清钙、磷浓度亦升高(P＜0.05)。与OVX+E组相比:OVX+Y组大鼠血清钙、磷浓度无明显差别(P＞0.05)。
5各组大鼠血清雌二醇浓度、骨钙素、碱性磷酸酶的比较
与Sham组相比:OVX组和OVX+Y血清雌二醇水平明显降低(P＜0.05、)。与OVX组相比:OVX+E组和OVX+Y组血清雌二醇水平明显增加(P＜0.05)。与OVX+E组相比:OVX+Y组大鼠血清钙、磷浓度无明显差别(P＞0.05)。
与Sham组相比:OVX+Y与OVX组之间的血清中骨钙素浓度明显增加(P＜0.05;P＜0.05)。与OVX组相比:OVX+Y组血清中骨钙素浓度升高(P＜0.05)。与OVX+E组相比:OVX+Y组血清中骨钙素浓度升高(P＜0.05)。
与Sham组相比:OVX+Y组和与OVX组血清碱性磷酸酶的活性增加(P＜0.05);与OVX组相比:OVX+Y组碱性磷酸酶活性降低(P＜0.05),OVX+E组血清碱性磷酸酶的活性亦降低(P＜0.05);与OVX+E组相比:OVX+Y组血清碱性磷酸酶的活性升高(P＜0.05)。
结论:
1 PMOP模型建立;
2 OVX导致大鼠体重增加,是机体阻止骨丢失的一种不完全代偿机制;
3运脾滋肾汤可预防OVX所致骨丢失;
4运脾滋肾汤通过增加机体的血清钙、骨钙素及雌二醇的浓度,降低血清碱性磷酸酶的活性来防治骨丢失。
5运脾滋肾汤预防治疗绝经后骨质疏松症的机制是通过对机体多方位、多环节的调节作用来实现的。