【摘 要】
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目的研究结肠癌细胞系球培养后能否富集肿瘤干细胞,以及这种球细胞是否发生了上皮间质转化。方法采用结肠癌细胞系HT29, HCT116,进行球细胞培养。检测其肿瘤干细胞表面标志的
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目的研究结肠癌细胞系球培养后能否富集肿瘤干细胞,以及这种球细胞是否发生了上皮间质转化。方法采用结肠癌细胞系HT29, HCT116,进行球细胞培养。检测其肿瘤干细胞表面标志的表达情况。球细胞与贴壁细胞对照,分别进行Trans well侵袭和迁移实验,软琼脂克隆形成实验。并使用RT-PCR和Western blot对比分析球细胞和贴壁细胞EMT相关基因和蛋白的表达情况。结果结肠癌细胞系HT29, HCT116均能形成肿瘤球细胞。检测球细胞中干细胞标志物升高。Transwell和软琼脂克隆形成实验中,球细胞较相应的贴壁细胞迁移、侵袭和克隆形成能力均增强,统计分析有显著差异(P<0.05)。上皮细胞基因ZO-1在球细胞中的表达较贴壁细胞减少,同时球细胞中间质细胞基因vimentin和fibronectin的表达较贴壁细胞升高,统计分析有显著差异(P<0.05)。结论结肠癌细胞HT29和HCT116经无血清悬浮培养后可形成球细胞。这种球细胞表达干细胞的表面标志,提示球细胞富含肿瘤干细胞。球细胞的迁移、侵袭和成瘤能力的增强,提示肿瘤干细胞可增强肿瘤的恶性行为。球细胞在基因和蛋白的水平显示出上皮样细胞特性的丧失,并获得了间质细胞样的特性,提示上皮间质转化过程可能在肿瘤干细胞的形成中起重要作用。
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