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巴西橡胶树（Hevea brasiliensis）是重要的热带作物,是我国特种经济作物。目前包括RFLP、AFLP、RAPD、SSR、SNP等十多种分子标记已在橡胶树上得到应用,主要集中在橡胶树连锁遗传图谱的构建、品种鉴定、分子标记辅助育种和遗传多样性研究中。巴西橡胶树的全基因组测序开展的较晚,于2013、2016和2017年分别完成对RRIM600、热研7-33-97和BPM 24三个橡胶树品种的全基因组测序,但也仅组装到Scaffold水平,尚未达到染色体水平,因此本研究从单条染色体入手,构建巴西橡胶树单染色体文库,对单染色体文库部分序列进行基因功能注释,旨在为橡胶树基因组研究提供新的思路与方法,为分子辅助育种提供基础。具体研究结果如下:（1）以巴西橡胶树热研7-33-97古铜期幼叶为材料制备染色体制片,从其中期分裂相中分离出32条染色体,并将分离出的单染色体用LA-PCR法扩增,其中有24条染色体检测有条带,条带大小多为300-4000 bp,对24条检测有条带的单染色体进行Dot-blot杂交验证其扩增来源,其中有22条杂交成功,证明其来自巴西橡胶树。随机选取5条斑点杂交成功的染色体进行Southern杂交,进一步证明了其来源于巴西橡胶树基因组,进而对这5条染色体进行荧光原位杂交验证并结合核型分析确定其分别为热研7-33-97的第3、7、13、15及16号染色体。（2）对已构建的单染色体文库连接转化与培养体系步骤进行了优化,优化后震荡培养时间为45 min,涂平板时菌液涂布体积确定为20μl/板,37℃倒置培养16 h。利用此体系本试验成功构建了巴西橡胶树热研7-33-97的第3、7、13、15及16号染色体微克隆文库,分别获得了 4.26×105个、3.6×105个、4.97×105个、2.83×105个、2.91×105个克隆子,插入片段范围依次为250～850bp、150～800bp、250～1200 bp、250～800 bp、250～1000 bp,平均插入片段依次为 437 bp、382 bp、491 bp、460 bp、456 bp,文库的覆盖率依次为2.1倍、1.6倍、3.6倍、2.1倍、2.3倍,空载率分别为3%、7%、2%、1%、2%。（3）随机获得了热研7-33-97的第3、7、13、15、16号染色体文库中的部分阳性克隆子测序序列,分别为80、88、83、81、111条,将测序结果与NCBI上巴西橡胶树热研7-33-97全基因组数据库（GCA001654055.1）、RRIM600全基因组数据库（GCA001907995.1）、EST数据库、巴西橡胶树18个分子标记的遗传图谱进行在线比对。该五条染色体文库中与热研7-33-97全基因组数据库（GCA001654055.1）有高同源性的分别为19、40、15、14、18条;与橡胶树EST文库同源性大于90%的依次为20、42、16、29、21条,经功能分析后多数与橡胶树耐割性、抗冻性、割面干涸病（死皮病）、耐盐性及胶乳形成相关。其中L-7Chr-4与橡胶树胶乳形成相关,还与EST序列GenBank: JZ378253.1的同源相似性为97%,经功能注释该编号与陆地棉苗根系抗盐胁迫相关。（4）对五个染色体文库中与橡胶树全基因组数据库和EST数据库有高同源性的21条序列进行了 Blast2GO软件分析,比对上有高同源性的序列有14条,对这14条序列用Blast2GO软件进行GO MAP比对,其中8条序列得到了 GO术语注释结果,共得到41个GO ID,其中生物学途径（P） 22个、细胞组分（C） 12个和分子功能（F） 7个,对41个注释结果进行GO分级,共分为5级,有不同的功能,在生物学途径方面主要参与细胞过程、代谢过程、单有机体过程、生物体调控、生物合成过程、初级代谢等方面;在分子功能方面,主要参与催化活性、运输活性和转移酶活性等;在细胞组件部分主要是参与细胞部分、细胞、细胞器的组成。对经过GO注释后的序列进行Enzyme Code和KEGG代谢途径分析,在3号染色体文库的L-3Chr-3序列上得到一个酶注释,ID为2.7.7.49,为谷氨酰胺腺苷转移酶,但并未获得代谢途径。